甲基苯丙胺引起肾小管上皮细胞损伤的作用及机制研究

作     者：肖逸 

作者单位：南京医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张炜

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100205[医学-精神病与精神卫生学] 10[医学] 

主      题：甲基苯丙胺 肾小管上皮细胞 自噬 氧化应激 凋亡 

摘      要：目的:本研究主要通过体外实验对甲基苯丙胺(Methamphetamine,Meth)暴露引起的肾小管上皮细胞(HK-2 cell)损伤的作用及潜在机制进行探索。阐述Meth暴露后氧化应激反应,自噬及HK-2细胞凋亡三者之间的联系。方法:首先构建不同浓度甲基苯丙胺浓度暴露下(0μM,100μM,300μM,900μM)的肾小管上皮细胞损伤模型;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测肾小管上皮细胞相关炎性指标(TNF-α,IL-1β和IL-6),明确肾小管上皮细胞损伤模型的建立;采用CCK8法和2’,7’-Dichlorofluorescin diacetate分别法检测不同浓度甲基苯丙胺作用后的细胞活力和氧化应激程度;采用Western blot法检测氧化应激、自噬及凋亡等在甲基苯丙胺作用后相关蛋白表达的改变。通过氧化应激抑制剂来观察下游自噬及凋亡的变化。结果:甲基苯丙胺可成功诱导体外肾上皮细胞HK-2的损伤,表现为肾损标志性蛋白KIM-1及NGAL的上调;随着甲基苯丙胺暴露浓度的升高,对肾小管上皮细胞的毒性作用越强;表现为甲基苯丙胺浓度的增加,肾小管上皮细胞的细胞活力逐渐降低,而氧化应激水平逐渐升高;自噬相关蛋白(p-m TOR,Beclin1,p62及LC3B)及凋亡相关蛋白(PARP,Bax和Bcl2)表达显著增加;加入氧化应激抑制剂后,肾小管上皮细胞的氧化应激水平,自噬及凋亡等现象明显抑制。结论:甲基苯丙胺暴露对肾小管上皮细胞的毒性作用呈剂量依赖性;甲基苯丙胺主要通过氧化应激诱导的自噬异常和细胞凋亡促进肾小管上皮细胞损伤。