Galectin-10（CLC）通过p38MAPK/NF-κB通路影响嗜酸性粒细胞内炎性因子及颗粒蛋白的分泌

作     者：王耀洁 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘红兵

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：嗜酸性粒细胞 CLC Galectin-10 p38MAPK/NF-κB通路 

摘      要：目的:研究Galectin-10/CLC对嗜酸性粒细胞内炎性因子及颗粒蛋白的分泌是否有影响,这一过程是否可能通过p38MAPK/NF-κB通路,探讨Galectin-10是否可作为嗜酸粒细胞性疾病的潜在治疗靶点。方法:购买人嗜酸性粒细胞（HESP）悬浮细胞,在DMEM+15%FBS+1%双抗+IL-5培养基中培养。用美蓝-伊红Y（Wright’s stain）染色进行嗜酸性粒细胞鉴定。鉴定成功后,将人嗜酸性粒细胞（HESP）分为五个组,分别为:对照组、空载组、Gal-10-121干扰组、Gal-10-240干扰组及Gal-10-403干扰组。对照组细胞不做处理,空载组细胞用si RNA-NC转染,干扰组细胞用si RNA-galectin-10-121、si RNA-galectin-10-240及si RNA-galectin-10-403转染。然后用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Galectin-10蛋白在五组细胞中的表达。验证转染成功后,取Galectin-10蛋白表达最低组（Gal-10-403干扰组）的干扰载体进行后续实验。随后用酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA）检测对照组、空载组及Gal-10干扰组三组细胞上清液中IL-4、IL-5、IL-8、MBP、ECP以及TNF-α的表达。用Western blot检测以上三组细胞p-p38和p-p65蛋白的表达。统计学方法:实验数据中对各组计量数据进行正态分布检验和方差齐性分析,若各组数据均符合正态分布、满足方差齐性要求,多组间采用one-way AVONA检验,两组间采用独立样本LSD检验;统计比较的结果以P0.05为差异有统计学意义。结果:1、采用Western blot方法检测对照组、空载组、Gal-10-121干扰组、Gal-10-240干扰组及Gal-10-403干扰组中Galectin-10蛋白的表达水平,验证Galectin-10干扰载体的转染效果。结果显示,Gal-10-121干扰组、Gal-10-240干扰组、Gal-10-403干扰组分别与对照组及空载组相比,其内Galectin-10蛋白的表达水平更低,且P值均0.05,差异有统计学意义。空载组与对照组相比,Galectin-10蛋白的表达水平差异无统计学意义。另外,Gal-10-403干扰组、Gal-10-121干扰组和Gal-10-240干扰组三组之间两两相比,Galectin-10蛋白的表达水平差异均无统计学意义,但Gal-10-403干扰组与Gal-10-121干扰组及Gal-10-240干扰组相比,其内Galectin-10蛋白的表达水平更低。所以,最终选取si RNA-galectin-10-403为本实验的干扰载体。2、采用酶联免疫吸附剂测定（ELISA）检测对照组、空载组及Gal-10干扰组中IL-4、IL-5、IL-8、MBP、ECP以及TNF-α的表达水平。结果显示,与对照组及空载组相比,Gal-10干扰组中IL-4、IL-5、IL-8、MBP及TNF-α的表达水平更低,P值均0.05,差异有统计学意义;空载组与对照组相比,IL-4、IL-5、IL-8、MBP及TNF-α的表达水平差异均无统计学意义。而对照组、空载组及Gal-10干扰组之间任意两组相比,ECP的表达均无明显差异,P值均0.05。3、采用Western blot方法检测对照组、空载组及Gal-10干扰组中p-p38和p-p65蛋白的表达水平。结果显示,与对照组及空载组相比,Gal-10干扰组中p-p38蛋白和p-p65蛋白的表达水平更低,P值均0.05,差异有统计学意义。空载组与对照组相比,p-p38蛋白和p-p65蛋白的表达水平差异均无统计学意义。结论:人嗜酸性粒细胞中Galectin-10/CLC的下降可影响其内IL-4、IL-5、IL-8、MBP及TNF-α的表达降低,然而ECP的表达不受影响。而这一变化,可能通过p38MAPK/NF-κB通路。提示Galectin-10/CLC可作为嗜酸性粒细胞性疾病的潜在治疗靶点。