盐穗木复方提取液对奶牛乳源性金黄色葡萄球菌的抑菌效果分析

作     者：董贵 

作者单位：塔里木大学 

学位级别：硕士

导师姓名：贺建忠;陶大勇;徐建平

授予年度：2022年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：盐穗木 复方 金黄色葡萄球菌 乳腺炎 药敏试验 抗炎 

摘      要：盐穗木生长于荒漠和盐碱地上,具有良好的生态学价值和一定的抑菌作用。为进一步开发和利用盐穗木的应用价值,探究其在临床中的治疗效果。本试验通过分离鉴定患乳腺炎的奶牛乳液中的金黄色葡萄球菌,使用盐穗木及其复方提取液对金黄色葡萄球菌进行体外抑菌试验,验证盐穗木复方的抑菌效果;通过试验观察盐穗木复方的刺激性和抗炎效果;通过动物感染试验,评价盐穗木复方对感染金黄色葡萄球菌的昆明小鼠的临床治疗效果,研究结果为盐穗木药物制剂的开发提供了基础数据参考。1.收集新疆阿拉尔市某规模化奶牛场73份患乳腺炎的奶牛乳液样本,采用细菌常规分离鉴定、革兰染色、生化试验等方法鉴定出疑似金黄色葡萄球菌32株。采用PCR扩增16S r RNA和nuc基因,通过序列比对分析,鉴定32株均为金黄色葡萄球菌。基于10种金黄色葡萄球菌毒力因子位点,采用PCR法,对32株金黄葡萄球菌进行毒力基因检测,发现同菌株间携带的毒力基因种类有所不同:其中携带tsst基因的菌株最多,占34.3%(11/32);pvl基因最少,为3.1%(1/32)。选取携带不同毒力基因的分离株分别感染小鼠,其结果显示,携带毒力基因类型越多的分离株致病力也越强。2.分别选用盐穗木、蒲公英、白头翁及其组成的复方,采用醇提的方法获取其提取液,提取液浓度均为1 g/m L。根据盐穗木在复方中所占比例的不同将盐穗木复方分为3组:复方I(盐穗木占比30%)、复方II(40%)、复方Ⅲ(50%)。通过肉汤稀释法,进行体外抑菌试验,初步测得复方中,复方Ⅰ和复方Ⅲ对金黄色葡萄球菌的MIC为300 mg/m L;复方II的MIC为250 mg/m L,MBC为250 mg/m L,复方II的抑菌效果最好。对复方II进行的药效稳定性试验结果显示,复方II的抑菌效果不受高压及p H于(6.0～7.5)之间变化的影响,可将盐穗木复方经过高压处理后用于临床治疗。3.将昆明系小鼠分为4组,其中3组试验组中的每只小鼠分别灌胃0.4 m L(1 g/m L)的盐穗木复方药剂,对照组灌胃0.4 m L生理盐水。通过连续给药的方式观察盐穗木复方药剂对小鼠胃、肠黏膜的刺激性,结果发现试验第1组和第2组中小鼠胃、肠壁黏膜与对照组中小鼠胃、肠壁黏膜并无差异,第3组的胃黏膜表面有轻微充血。通过二甲苯诱导小鼠炎症反应的试验中发现,盐穗木复方组、盐穗木组、阿司匹林组及生理盐水组对小鼠耳廓肿胀率分别59.22±10.42%,65.45±10.45%,55.71±11.71%,73.60±10.37%;将本试验分离得到的强致病性的分离株感染小鼠后,再通过比较盐穗木复方组和对照组对小鼠的治愈率发现,盐穗木复方组及抗生素组的治愈率分别为80%和90%,结果证明盐穗木复方对小鼠胃、肠黏膜无刺激性;盐穗木复方具有较好的抗炎作用;盐穗木复方在治疗小鼠感染金黄色葡萄球菌时也具有良好的治疗效果。上述结果表明,由盐穗木、蒲公英、白头翁组成的复方提取液的抑菌效果要优于盐穗木及其它单味中药,且盐穗木复方无刺激性、具有较好的抗炎效果、对感染金黄色葡萄球菌的昆明小鼠具有一定的疗效。研究结果为盐穗木复方制剂的临床开发和应用提供了基础参考资料。