低氧诱导组蛋白乳酸化调控子痫前期孕妇胎盘纤维化相关基因表达的研究

作     者：杨娜娜 

作者单位：蚌埠医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：杜丹丽

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100211[医学-妇产科学] 10[医学] 

主      题：乳酸化 胎盘 子痫前期 缺氧 乳酸 

摘      要：研究背景与目的:子痫前期(Preeclampsia,PE)是一种常见的妊娠期并发症,增加胎儿早产率和致死率,影响母婴健康,但目前其发病机制尚不完全清楚。胎盘子宫螺旋动脉重塑不足导致胎盘持续缺氧和功能障碍是PE发生发展的机制之一。最新发现的组蛋白赖氨酸乳酸化修饰可由缺氧和高乳酸环境所诱导,并调控基因转录。本课题拟研究缺氧和组蛋白乳酸化修饰在PE患者胎盘基因表达中的调控作用。研究方法:收取PE患者和对照组孕妇胎盘组织标本,培养HTR-8/SVneo和TEV-1人胎盘滋养细胞系,使用免疫印迹和免疫荧光等实验技术检测PE患者胎盘组蛋白乳酸化修饰水平并探讨缺氧和乳酸对组蛋白乳酸化修饰的影响。对人胎盘滋养细胞系经缺氧和乳酸钠处理后进行基因转录组测序,并通过GEO(GSE44711)数据库分析PE患者差异表达基因,筛出共同的差异表达基因并通过逆转录实时荧光定量PCR(Reverse trascription quantitative real-time PCR,RT-q PCR)验证。利用染色质免疫共沉淀-定量PCR(Chromatin immunoprecipitation-quantitative PCR,Ch IP-q PCR)技术研究缺氧和乳酸对靶基因启动子区组蛋白乳酸化修饰的影响。研究结果:1.和对照组比较,PE组胎盘乳酸含量和组蛋白乳酸化修饰水平显著增加。2.HTR-8/SVneo和TEV-1人胎盘滋养细胞系经缺氧、乳酸/乳酸钠处理后乳酸含量和组蛋白乳酸化修饰水平上升;乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)抑制剂草氨酸钠可显著抑制缺氧状态下乳酸的生成并纠正由缺氧引起的组蛋白乳酸化修饰水平增加。3.缺氧和乳酸钠处理后的HTR-8/SVneo细胞系共有152个基因表达上调,其中有9个基因在PE胎盘中也出现差异性表达。4.RT-q PCR检测发现PE胎盘组织中和经缺氧、乳酸/乳酸钠处理后滋养细胞系的FN1(Fibronectin 1,FN1)及SERPINE1(Serpin family E member 1,SERPINE1)基因表达均上升,而缺氧状态下对滋养细胞系进行草氨酸钠处理可纠正缺氧状态下FN1和SERPINE1基因表达的增加。5.ChIP-q PCR检测发现HTR-8/SVneo和TEV-1细胞经缺氧和乳酸钠处理后,其FN1和SERPINE1基因启动子区的H3K18la水平上升,而草氨酸钠处理可纠正其由缺氧引起的FN1和SERPINE1基因启动子区H3K18la水平的上升。研究结论:1.子痫前期患者胎盘乳酸含量较正常孕妇显著升高。2.低氧和乳酸诱导增加人胎盘滋养细胞系HTR-8/SVneo和TEV-1组蛋白乳酸化修饰水平。3.低氧诱导组蛋白乳酸化修饰上调子痫前期孕妇胎盘纤维化相关基因FN1和SERPINE 1的表达。