生物可降解抗HER2单抗/PCL-PEG/紫杉醇蠕虫状纳晶胶束靶向治疗HER2阳性乳腺癌的研究

作     者：彭佳惠 

作者单位：上海交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杜子秀

授予年度：2019年

学科分类：100702[医学-药剂学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：联合治疗 纳晶胶束 靶向 HER2阳性乳腺癌 

摘      要：乳腺癌中HER2基因的过表达与肿瘤侵袭性强、复发率高有关。目前临床上主要利用抗HER2的抗体药物(赫赛汀,Herceptin)联合化疗药物制剂(如TAXOL?)来延长此类患者的生存期并提高生活质量。针对其弊端,本研究利用赫赛汀对HER2受体的特异靶向性和紫杉醇的良好抗肿瘤活性,构建出表面连有赫赛汀的PCL-PEG/紫杉醇(PTX)蠕虫状纳米结晶胶束,用于HER2阳性乳腺癌的靶向组合治疗。首先,我们通过考察不同嵌段比例的PCL-PEG自组装胶束的粒径、分布、稳定性及载药能力,优选出PCL-MPEG和PCL-PEG-CHO质量比为3:7的材料来包裹PTX。在TEM实验中发现未载药的空白胶束为类球状纳米颗粒,载PTX后则形成了蠕虫状胶束(PTX@PCL-PEG),然后首次利用了Herceptin表面的伯氨基与PTX@PCL-PEG表面暴露的醛基形成碳氮单键(-C-N-),构建出稳定的靶向载药胶束(PTX@PCL-PEG-Herceptin)。相较于其他可降解连接键如酯键、二硫键、酰胺键等,碳氮单键不易降解;相较于硫醚键连接方法操作简单,不需要对蛋白进行修饰或改造。在此基础上,我们对所得制剂的体内外各方面进行了考察。实验结果显示,所制得的PTX@PCL-PEG-Herceptin粒径在170 nm左右,分布均一,血清稳定性实验结果表明胶束三天内的稳定性良好,载药量和包封率分别为6.3%和90%,Bradford法测定抗体偶联率为52.6%。体外释放实验结果显示在中性条件下,相较于市售紫杉醇注射剂,胶束释放更为缓慢,而在酸性条件下释放速度明显增加。在细胞水平上,不论是否连有抗体,胶束都主要通过小窝蛋白介导的途径进入细胞,但与PTX@PCL-PEG相比,Herceptin的连接显著增强了胶束与HER2阳性乳腺癌细胞的结合,具有更高的细胞毒性。SD大鼠和荷SKBR-3乳腺癌裸鼠模型用于评估制剂的药代动力学、组织分布和体内抗肿瘤效果,结果表明,PTX@PCL-PEG-Herceptin更容易从循环系统进入各组织,更多的药物会聚集在肿瘤部位,在抑制肿瘤生长方面,与PTX@PCL-PEG和TAXOL?相比效果高出了2-3倍,并大大降低了药物副作用,延长荷瘤BALB/c裸鼠的存活时间。综上所述,我们成功制备了一种可以在血液和肿瘤微环境中保持稳定并靶向HER2阳性乳腺癌的纳米颗粒,这种合理易于产业化的抗体偶联的纳米制剂具备临床抗癌治疗的潜在价值。