黎药-冰糖草中二萜类化合物结构及其降糖活性研究

作     者：孙万莹 

作者单位：海南医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：张小坡

授予年度：2020年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100513[医学-民族医学(含：藏医学、蒙医学等)] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：冰糖草 二萜 抗糖尿病 降糖活性 网络药理学 

摘      要：目的:本文以冰糖草全草为研究对象,利用多种分离技术,对该植物中的二萜类化合物进行分离,并对其降糖活性进行研究。采用葡萄糖氧化酶检测法,研究分离所得二萜类化合物对Hep G2细胞糖消耗的影响,采用噻唑蓝(MTT)分析法检测所得二萜类化合物对棕榈酸(PA)诱导的MIN-6细胞损伤后细胞活力的影响以及基于网络药理学研究冰糖草二萜类成分抗糖尿病作用机制。通过上述研究,为冰糖草二萜对Hep G2细胞糖消耗的影响、对MIN-6细胞损伤后活力的影响及冰糖草二萜作用于糖尿病的可能靶蛋白提供参考。方法:1、用85%的乙醇水溶液对冰糖草全草进行回流提取,提取液减压浓缩至无醇味,用水溶解提取液,石油醚萃取除去脂溶性成分,继而母液采用二氯甲烷萃取,回收下层有机相,减压加热蒸去二氯甲烷,得到二氯甲烷萃取浸膏。利用色谱学方法,如硅胶柱色谱(CC)、凝胶柱色谱(Sephadex LH-20)和液相色谱(HPLC)等对二氯甲烷萃取部位进行分离。根据化合物的波谱学数据(HR-ESI-MS、1D NMR、2D NMR)等对分离出的化合物进行结构鉴定。2、采用葡萄糖氧化酶法,检测冰糖草二萜类化合物对Hep G2细胞糖消耗的影响。3、采用MTT分析法,检测冰糖草二萜类化合物对棕榈酸钠(PA)诱导MIN-6细胞损伤后细胞活力的影响。4、基于网络药理学,研究冰糖草二萜类化学成分抗糖尿病作用机制。结果:1、从冰糖草全草中分离并鉴定了12个二萜类成分,分别鉴定为:Scoparicol A(1)、Scoparicol B(2)、Scopadulcic acid D(3)、Scoparic acid E(4)、Scopadulcic acid E(5)、Iso-dulcinol(6)、Scopadulcic acid C(7)、Dulcidiol(8)、Scopadulciol/Dulcinol(9)、Scoparic acid B(10)、Scopadulcic acid B(11)、Scoparic acid C(12)。其中5个化合物(1-5)为未见文献报道的新化合物。2、本文测试了化合物6、7、9、10、11对Hep G2细胞的葡萄糖消耗的影响。结果表明化合物7可以增加Hep G2细胞的葡萄糖消耗量。3、本文测试了化合物3、4、6、7、9、10、11对PA诱导MIN-6细胞损伤后细胞活力的影响。结果表明,与模型组的细胞活力(34.48±0.82)%相比,当化合物浓度为25μmol/L时,3、6、7及10可提高MIN-6细胞的细胞活力,细胞活力分别为(41.31±3.64)%、(40.17±3.48)%、(40.64±2.92)%、(39.79±6.78)%,当化合物浓度为50μmol/L时,化合物7、10可显著提高MIN-6细胞的细胞活力,细胞活力分别为(45.74±1.50)%、(42.47±2.60)%。而其余化合物不具有提高MIN-6细胞活力的效果。4、研究表明PIK3CA、TNF、MAPK1、TP53为冰糖草二萜类成分作用于糖尿病的核心靶点蛋白。结论:1、从冰糖草全草中分离得到12个二萜类化合物,其中5个为新化合物。2、化合物7具有促进Hep G2细胞糖消耗的作用。3、化合物浓度为25μmol/L时,3、6、7及10可提高由PA诱导的MIN-6细胞损伤后的细胞活力;化合物浓度为50μmol/L时,7和10可显著提高由PA诱导的MIN-6细胞损伤后的细胞活力。4、PIK3CA、TNF、MAPK1、TP53是冰糖草二萜类成分作用于糖尿病的核心靶点蛋白。