LncSix1启动子多态性调控LncSix1微肽的表达及功能研究

作     者：韩沛功 

作者单位：华南农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：聂庆华;罗成龙

授予年度：2019年

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

主      题：鸡 lncSix1 启动子 微肽 SNP EEF1A1 

摘      要：近年来国外研究发现小分子微肽在骨骼肌发育中起到关键调控作用。对于鸡生产性能来讲,骨骼肌发育与肌纤维类型转化直接影响到鸡肉品质。本研究以隐性白羽洛克鸡,DF-1细胞为实验材料,利用PCR、qPCR、双荧光素酶报告实验、细胞转染、BiFC(荧光互补实验)等实验方法。探究了 lncSix1启动子区对于lncSix1表达量的影响以及lncSix1所编码微肽对于细胞增殖的调控。初步在lncSix1启动子区筛选出SNP位点,通过SNP关联分析以及在DF-1细胞中表达lncSix1启动子区不同SNP分型载体,揭示了 lncSix1与鸡生长性状的关系;同时通过质谱鉴定与微肽结合的因子,绘制出微肽结合蛋白的分子图谱,找出关键翻译延伸因子EEF1A1,通过预测发现其在EGFR信号通路通过激活磷酸化Akt来调控下游生长信号通路,从而促进了细胞增殖,这进一步说明了 lncSix1编码的微肽在细胞增殖中所参与的关键调控。实验结果:1 lncSix1启动子截短载体实验结果显示了有一个活性区域,因此推测此区域为lncSix1启动子区域。2 LncSix1启动子测序结果表明,lncSix1启动子区中存在3个SNP位点,这3个SNP位点通过关联分析表明了其与肉鸡胫长(P0.05),体重(P0.05)呈相关;通过对lncSix1启动子构建不同SNP分型在DF-1细胞中表达的qPCR结果显示,lncSix1启动子SNP对于lncSix1表达显著。3 lncSix1编码微肽与EEF1A1相结合参与了 EGFR信号通路的调控,从中激活了磷酸化Akt来影响下游基因的转录以及生长信号通路,在转录翻译水平上影响细胞的增殖过程。