芪丹益肺通窍方水提物制备工艺优化及其对AR大鼠血清中IgE、IL-10的影响

作     者：李东棋 

作者单位：成都中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：田理

授予年度：2021年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：芪丹益肺通窍方 HPLC多波长检测 变应性鼻炎 IgE IL-10 

摘      要：目的:芪丹益肺通窍方是导师基于玉屏风散创立的治疗变应性鼻炎的经典验方。本课题优选芪丹益肺通窍方水提物的制备工艺,建立其水提物中9种主要成分含量测定方法;研究芪丹益肺通窍方水提物对变应性鼻炎大鼠血清IgE、IL-10的影响。方法:1.参照《中国药典》2020年版高效液相色谱法(通则0512)测定含量,采用Agilent 1260高效液相色谱仪,Agilent ZORBX SB-C18色谱柱(250*4.6mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液组成的二元流动相系统梯度洗脱,二极管阵列检测器,检测波长分别为215nm(没食子酸、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷)、230nm(芍药苷)、252nm(甘草酸)、260nm(毛蕊异黄酮葡萄糖苷)、276nm(黄芩苷、汉黄芩苷)、323nm(检测阿魏酸),流速:1.0ml·min,进样体积:5μl,柱温为25℃。2.采用L(3)正交试验对加水量、煎煮时间、提取次数等影响水提效果的因素进行考察,以9种主要成分及出膏率的综合评分为评价指标,优选芪丹益肺通窍方水提工艺。3.将32只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组、西药组。除空白对照组外,其余3组均采用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏、双侧鼻腔滴鼻激发制备AR大鼠模型。造模成功后,中药组给予芪丹益肺通窍方水提物灌胃,西药组给予氯雷他定混悬液灌胃,模型组生理盐水灌胃。连续给药14d后处死大鼠,采用ELISA法检测血清中IgE、IL-10。结果:1.9种主要成分均能有效检出,分离度良好,且阴性无干扰;9种主要成分在进样浓度范围内与峰面积呈线性关系;9种主要成分的精密度试验、重复性试验、稳定性试验RSD(%)均小于3.00%;9种主要成分加样回收率均在95.00%～105.00%范围内,RSD(%)均小于3.00%,表明本试验所采用的HPLC含量测定方法稳定可行。2.芪丹益肺通窍方水提物制备工艺为:加5倍量水,煎煮提取3次,每次60分钟,减压浓缩成每ml含生药2.8g的浓缩液。3.芪丹益肺通窍方水提物可有效控制模型大鼠鼻痒、喷嚏等症状;对比血清中IL-10及IgE含量水平,与空白对照组比较,模型组大鼠血清中IL-10水平降低、IgE水平明显升高(均P0.05)。结论:1.本实验建立的HPLC含量测定方法稳定可靠,可用于本方水提物中9种成分的含量测定。2.芪丹益肺通窍方水提物的优选制备工艺为加5倍量水,煎煮提取3次,每次60分钟,减压浓缩成每ml含生药2.8g的浓缩液。3.芪丹益肺通窍方水提物可有效控制变应性大鼠鼻痒、喷嚏等症状,对变应性鼻炎有治疗作用;其抗敏作用与调节IgE和IL-10水平有关。