肝吸虫特异性IgG抗体纳米金棒检测血清循环抗原基础研究

作     者：廉晓丽 

作者单位：大理大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杨毅梅

授予年度：2019年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：纳米金棒 肝吸虫病 特异性IgG抗体 血清循环抗原 生物标记技术 

摘      要：目的制备高纯度肝吸虫特异性IgG抗体,优选出纳米金棒表面标记肝吸虫特异性IgG抗体的最适浓度,获得肝吸虫特异性IgG抗体功能化纳米金棒并应用于检测血清循环抗原,研究功能化纳米金棒用于肝吸虫病早期或者低度感染血清循环抗原的检测效应。方法1.种子介导的生长法聚合不同径长比的所需稳定的纳米金棒。2.通过建立肝吸虫病动物模型来收集肝吸虫抗血清,层析柱纯化得到肝吸虫特异性IgG抗体,SDS-PAGE鉴定纯化效果。巯基化的特异性IgG抗体与纳米金棒结合,对比紫外分光光度计扫描标记前后纳米金棒表面纵向等离子共振吸收峰红移大小,优选出最佳包被浓度,构建功能化的纳米金棒。3.筛选血清循环抗原相关组分。SDS-PAGE纯化并洗脱收集每个时期肝吸虫排泄分泌纯化抗原条带。分别将各期的排泄分泌纯化抗原巯基化后与纳米金棒结合,构建肝吸虫排泄分泌纯化抗原功能化纳米金棒检测肝吸虫阳性血清抗体。观察紫外分光光度计扫描检测前后纳米金棒表面纵向等离子共振吸收峰红移情况,分析排泄分泌抗原的免疫反应性,鉴定血清循环抗原的抗原性。4.肝吸虫特异性IgG抗体功能化的纳米金棒对肝吸虫不同感染时间、不同感染度和不同稀释度的血清循环抗原进行检测,对比大鼠肝吸虫ELISA检测结果,分析功能化纳米金棒的检测优势。结果1.成功的建立肝吸虫囊蚴感染大鼠模型,并收集了不同感染度、不同感染时间的肝吸虫血清,通过纯化获得高纯度的肝吸虫特异性IgG抗体。2.纳米金棒标记浓度为20μg/m L肝吸虫特异性IgG抗体时,经紫外分光光度计扫描,表面纵向等离子共振吸收峰相比标记前出现最大红移为20nm,且峰形正常,即可确定最佳包被浓度为20μg/m L。3.筛选出较强抗原性的血清特异性排泄分泌纯化抗原,确定血清循环抗原作为血清诊断抗原。4.肝吸虫特异性IgG抗体功能化纳米金棒在轻中重度感染的第3d均可检测到阳性结果,且可识别最低感染量为50条囊蚴的血清循环抗原。而ELISA在轻度感染第17d检测到阳性,在中重度感染的第10d检测到阳性。功能化纳米金棒检测到阳性的时间比ELISA分别提前14d、7d。功能化纳米金棒能够检测的阳性血清循环抗原最大稀释度为1:400,ELISA检测法能够检测到的最大稀释度为1:100。结论使用优化的种子介导法制备出纵横比可调稳定的纳米金棒。优选出纳米金棒表面标记特异性IgG抗体的最适浓度为20μg/m L。获得肝吸虫特异性IgG抗体功能化纳米金棒的检测结果。对比ELISA检测结果发现功能化的纳米金棒具有检测灵敏性和早期性的优势,且操作简单,成本低,为肝吸虫病的早期诊断提供了新的技术支持。