组蛋白去甲基化酶KDM4B对牦牛卵丘细胞功能的影响

作     者：马鸿程 

作者单位：西南民族大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李键;熊显荣

授予年度：2021年

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

主      题：牦牛 KDM4B 卵丘细胞 增殖凋亡 共培养 

摘      要：牦牛作为藏区特种经济动物,对当地经济发展意义重大。但其生殖能力低下,成为牦牛产业发展的瓶颈之一。卵泡发育与卵母细胞减数分裂成熟是影响雌性哺乳动物生殖效率的主要原因之一,卵泡中卵丘颗粒细胞作为紧邻着卵母细胞的颗粒细胞亚群,通过缝隙连接对卵母细胞成熟起着至关重要的作用。KDM4B作为组蛋白去甲基化酶家族成员之一,主要通过对H3K9me的去甲基化作用直接或间接的参与细胞增殖、分化、衰老及凋亡等生物学过程。前期研究表明KDM4B在不同妊娠结局的卵泡细胞中差异表达,但其对牦牛卵丘细胞相关功能的调控作用目前尚未可知。因此,本试验通过实时荧光定量PCR(Real-time quantification PCR,RT-qPCR)、免疫组织化学及免疫荧光染色等技术探究KDM4B在牦牛不同组织、不同发育阶段卵泡及卵丘细胞中的表达规律;利用RNAi技术干扰卵丘颗粒细胞中KDM4B基因的表达,并通过免疫荧光、RT-qPCR、CCK-8、TUNEL染色及ELISA方法检测干扰KDM4B对卵丘颗粒细胞相关生物学功能的影响;通过建立共培养体系,初步探讨卵丘颗粒细胞KDM4B表达对卵母细胞减数分裂成熟的影响。结果显示:***4B mRNA在牦牛各组织中广谱表达,其中卵巢组织高表达(P0.05),但H3K9me2/3水平极显著升高(P0.05)。综上,KDM4B在牦牛各组织及卵泡发育进程中动态表达,参与调节卵丘颗粒胞H3K9me2/3水平及相关基因表达,进而影响卵丘颗粒细胞增殖凋亡、雌激素分泌水平以及共培养卵母细胞减数分裂成熟能力。本试验首次探讨KDM4B对牦牛卵丘颗粒细胞功能的影响,为进一步研究KDM4B在卵泡发育及卵母细胞发育的调控机制提供基础依据。