蒙药材肉苁蓉的道地性鉴别及其抗氧化应激反应研究

作     者：胡日巴 

作者单位：内蒙古医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：锡林其其格

授予年度：2021年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100513[医学-民族医学(含：藏医学、蒙医学等)] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：肉苁蓉 道地性 顺铂 生殖系统 氧化应激 

摘      要：目的:本研究根据《中国药典》(2015版)的质控标准,对四个不同产地肉苁蓉进行性状鉴别、薄层鉴别和主要成分含量测定的基础上,立足于肉苁蓉具有壮阳作用的蒙医理论,建立大鼠雄性生殖系统损伤模型,探讨各地肉苁蓉对大鼠精子数量、精子功能及睾丸组织病理学变化和睾丸氧化应激水平的影响,尝试从肉苁蓉对雄性生殖系统损伤的改善作用方面,对内蒙古道地性药材肉苁蓉的道地性特征进性科学的论证。方法:1.不同产地肉苁蓉质量标控:照中国药典(2015年版)的方法,对内蒙古阿拉善,新疆喀什,新疆阿克苏,甘肃等产地的蒙药材肉苁蓉进行显徽鉴别和薄层鉴别,并采用高效液相色谱法测定药材中松果菊苷含量。2.药理实验(1)选择SPF级雄性Wistar大鼠,即空白组、顺铂(CP)模型组、阳性对照DHEA组(5.166mg/kg)、内蒙古肉苁蓉高、中、低剂量组等随机分为6组,每组10只。给药15天后处死动物,取血清、睾丸组织、附睾尾部精子等检测相关指标。除了空白组外,其他组在第10天一次性腹腔注射CP为6mg/kg,进行造模。(1)造模指标:常规制备睾丸组织病理切片,HE染色后在显微镜下观察病理学变化。(2)睾丸功能:通过采用尼康DS型显微镜和NIS-Elements软件测定精子浓度和活力。(3)氧化应激指标:采用q-PCR法检测SOD,可见光度法CAT,酶标法GSH,T-aoc检测过氧化应激反应指标。(4)用生化法分别检测丙二醛(MDA),并用睾丸组织中的超氧化物歧化酶。(5)线粒体稳定性:通过采用化学荧光测定法检测睾丸组织中的ROS含量和mRNA表达水平。3.药理实验(2)选择SPF级雄性Wistar大鼠,即空白组、顺铂(CP)模型组、阳性对照DHEA组(5.166mg/kg)、内蒙古阿拉善,新疆喀什,新疆阿克苏,甘肃等产地肉苁蓉组随机分为7组,每组10只。实验方法与步骤药理实验(1)相同。结果:1.通过本研究成功复制了 CP诱导的雄性生殖系统损伤大鼠模型。CP诱导的雄性生殖系统损伤大鼠模型是典型的生殖系统氧化应激模型。实验证明基于蒙医理论,研究肉苁蓉的壮阳作用,可作为疾病模型。2.根据《中国药典》(2015版)的质控标准,进行了四个不同产地肉苁蓉的性状鉴别、薄层鉴别和主要成分含量测定。以上四个产地的肉苁蓉在形状特征方面稍有不同,但显微鉴别、薄层鉴别和含量测定结果显示都符合肉苁蓉的鉴别标准,并且松果菊苷的含量在内蒙古肉苁蓉中最高,达到0.5307mg/g。3.本研究对大鼠雄性生殖系统损伤模型灌胃内蒙古道地药材阿拉善产肉苁蓉大、中、小计量后,观察了药物对大鼠精子数量、精子功能及睾丸组织病理学变化和睾丸氧化应激水平的影响,实验结果显示,中计量组(0.31g/kg)的大鼠精子数量增加最明显、精子功能改善最好,睾丸组织病理损伤恢复最明显,睾丸氧化损伤程度最小。4.内蒙古、甘肃、新疆等4个不同产肉苁蓉对CP诱导的雄性生殖系统损伤的作用对比研究中,内蒙古阿拉善产的肉苁蓉的大鼠精子数量增加最明显、精子功能改善最好,睾丸组织病理损伤恢复程度最佳,睾丸和血清氧化损伤程度最小,如睾丸组织与血清SOD酶活力、GSH、CAT、T-AOC增强程度最高,MDA、ROS含量下降最低。5.以上实验结果显示,肉苁蓉对雄性生殖系统具有明显的保护作用,且存在计量效应。阿拉善产肉苁蓉作为内蒙古道地药材,对雄性生殖系统的保护作用方面,即壮阳功能方面的道地性特征突出。结论:(1)CP诱导的生殖系统损伤模型建立成功。(2)对内蒙古阿拉善,新疆喀什,新疆阿克苏,甘肃等产地肉苁蓉质量标控中内蒙古肉苁蓉质量优良,松果菊苷含量与其他组高。(3)用CP诱导睾丸损伤模型是典型的氧化应激模型。肉苁蓉中剂量能减弱氧化应激效应。(4)通过药理实验内蒙古肉苁蓉对生殖系统损伤治疗作用极佳。(5)通过本次实验对内蒙古阿拉善肉苁蓉道地性提供了有效依据。