蒙药森登四味汤对银屑病小鼠炎症抑制作用的实验研究

作     者：李娇娇 

作者单位：内蒙古医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孙立

授予年度：2021年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100513[医学-民族医学(含：藏医学、蒙医学等)] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：银屑病 蒙药森登四味汤 银屑病动物模型 Th17/Treg细胞 蛋白通路 

摘      要：目的:探索蒙药森登四味汤对咪喹莫特（IMQ）乳膏诱导的银屑病小鼠模型的治疗作用及机制,为蒙药森登四味汤在治疗银屑病临床进一步推广应用提供理论依据。方法:采用95%乙醇提取蒙药森登四味汤,用冻干技术将其制为冻干粉;筛选60只8周龄BABL/c雄性小鼠,随机分为6组,每组各10只,即空白对照组（简称CK组）、模型组（简称MODEL组）、甲氨蝶呤组（简称MTX组）、森登低剂量组（简称森登L组）、森登中剂量组（简称森登M组）、森登高剂量组（简称森登H组）。CK组每日背部涂抹62.5mg凡士林乳膏,其余5组每日背部涂抹62.5mg5%IMQ乳膏,连续10天,CK组、MTX组、森登L组、森登M组、森登H组从第4天开始分别用生理盐水、MTX（2mg/kg）、低剂量蒙药森登四味汤（0.315g/kg）、中剂量蒙药森登四味汤（0.63g/kg）、高剂量蒙药森登四味汤（1.26g/kg）0.2ml/d灌胃,连续7天。肉眼观察背部皮肤变化,并计算银屑病皮损面积和严重程度指数评分（PASI评分）;组织切片HE染色检测组织病理变化,Ki67免疫组化检测增殖情况;计算各组小鼠脾脏指数,脾脏指数=脾脏重量（mg）/体重（g）;利用流式细胞学检测腹股沟淋巴结中Th17/Treg细胞比例;采用western blot方法检测皮损中p-p38、p38、P-STAT3、STAT3、P-JAK1、JAK1通路蛋白的表达。结果:（1）与CK组相比,MODEL组小鼠出现显著皮肤肥厚、红斑、鳞屑;与MODEL组相比,在同一时间,森登L、M、H组和MTX组小鼠红斑减少,鳞屑稀少,皮肤厚度减少,PASI评分下降。其中MTX组和森登M组的作用最明显,森登L组和森登H组次之;（2）组织切片HE染色、Ki67免疫组化:与CK组相比,MODEL组小鼠出现表皮角质层增厚、角化不全、Munro微脓肿及真皮毛细血管增生及淋巴细胞浸润,Ki67高表达;与MODEL组相比,森登M组和MTX组表现为角质层厚度减少、角化不全减少,Munro微脓肿减少甚至消失,真皮毛细血管增生及淋巴细胞浸润程度降低,Ki67低表达;森登L组和森登H组也可改善小鼠病理结构,但程度不及森登M组;（3）与CK组相比,MODEL组的脾脏指数升高,差异有统计学意义（P0.05）;经治疗后MTX组和森登M组的脾脏指数均比MODEL组降低,差异有统计学意义（P0.05）;森登L组小鼠脾脏指数与MODEL组相比差异无统计学意义;森登H组与MODEL组相比脾脏指数降低,差异有统计学意义（P0.05）;（4）流式细胞学:与CK相比,MODEL组Treg细胞比例降低,Th17细胞比例升高;与MODEL组相比,MTX组、森登M组、森登L组和森登H组Treg细胞比例升高,Th17细胞比例降低,其中MTX组和森登M组的作用最明显,森登L组和森登H组次之;（5）western blot法:与CK组相比,MODEL组p-p38、p38、p-STAT3、p-JAK1表达增加;与MODEL组相比,MTX组和森登M组可明显降低p-p38、p38、p-STAT3、p-JAK1的表达,森登L组和森登H组也可降低p-p38、p38、p-STAT3、p-JAK1的表达,但程度不及森登M组,各组STAT3、JAK1的表达无明显差异。结论:（1）蒙药森登四味汤能有效减轻IMQ诱导的银屑病小鼠皮炎症状,降低PASI评分,改善病理结构特征,降低Ki67的表达,降低脾脏指数,中等剂量（0.63g/kg）为最佳浓度;（2）蒙药森登四味汤对IMQ诱导的银屑病样小鼠有抑制作用,与调节Th17/Treg细胞（上调Treg细胞、下调Th17细胞）、降低p38及p38、STAT3、JAK1的磷酸化水平有关,可能通过JAKSTAT、p38 MAPK蛋白通路发挥作用。