北沙参多糖对小鼠及RAW264.7细胞的免疫功能影响的实验研究

作     者：于思文 

作者单位：延边大学 

学位级别：硕士

导师姓名：康东周

授予年度：2020年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：北沙参 多糖 免疫活性 

摘      要：目的:北沙参作为药食两用药材,活性成分丰富,药理作用明显,具有较好的开发利用前景。北沙参含有多种复杂成分,其中以多糖类所占比例最大,并且是增强、调节免疫功能的主要成分。本文采用北沙参多糖为研究对象,探究其对免疫功能的影响,为北沙参多糖免疫功能类保健食品进一步开发、利用赋予新的活力,并为长白山道地药材的运用提供理论依据。方法:体外细胞实验:①本实验以北沙参多糖为研究对象,采用超声波提取法、热水浸提法及纤维素酶提取法来提取多糖,并经过Sevage法除蛋白。采用苯酚-硫酸法测北沙参多糖的总糖含量,并对其精密度和重复性进行考察。②通过设置给药浓度为37.5、75、150及300 μg/mL的北沙参多糖,与小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)共同培养,采用ELISA法,检测共同培养后的细胞上清液中免疫因子白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量变化;采取MTT比色法,测定北沙参多糖对巨噬细胞(RAW 264.7)的增殖作用的影响;采取Griess法,测定细胞上清液中一氧化氮(NO)的变化。③北沙参多糖在CON A的刺激下,诱导小鼠脾脏细胞,探究其对小鼠脾细胞的白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)含量的变化。体内动物实验:采用BALB/C小鼠,分为北沙参多糖低(200 mg/mL)、中(400 mg/mL)、高(800 mg/mL)剂量组及空白对照组,北沙参多糖组按体重比例灌胃,空白对照组按体重比例给与生理盐水,饲养28天。检测小鼠的体重变化、胸腺及脾脏指数;采用LDH法检测小鼠脾脏细胞与靶细胞YAC-1共同培养对NK自然杀伤细胞的活性影响;采用CCK-8法检测小鼠脾脏的T、B淋巴增殖情况;采用ELISA法检测小鼠血清中细胞因子的含量变化;采用流式细胞术检测小鼠脾脏细胞中淋巴亚群的分布情况。结果:体外细胞实验:①北沙参多糖的提取率:超声波提取法(14.89%)热水浸提法(23.93%)纤维素酶提取法(24.22%),多糖含量:纤维素酶提取法(58.05%)超声波提取法(73.25%)热水浸提法(75.48%),经比较热水浸提法为最佳方法,提取方法的精密度R均低于5%、重复性R均低于6%。结果表示,热水浸提法用于北沙参多糖的提取准确可靠。②北沙参多糖在37.5～300μg/mL剂量范围内,与空白对照组相比,可显著促进免疫因子IL-6和TNF-α含量及NO的分泌水平增加。③北沙参多糖促进CON A诱导的脾细胞分泌IL-2、IFN-γ的含量增加,且随着浓度的增加呈剂量依赖性。体内动物实验:北沙参多糖组对小鼠的体重无影响,对小鼠的胸腺及脾脏指数均有显著性的提高并具有统计学差异;北沙参多糖组对NK细胞活性及T、B淋巴细胞的增殖均有显著性提高并具有统计学差异;北沙参多糖组在一定范围内可以升高小鼠血清中的细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ的含量,具有统计学意义;淋巴细胞亚群分布实验的结果表示北沙参多糖组能够明显的提高小鼠CD3+、CD3+CD4+、及CD3-CD19+细胞的百分比,降低CD3+CD8+的百分比,并增加小鼠脾脏中CD4+/CD8+的比值,说明北沙参多糖能够调节淋巴细胞亚群的分布。结论:北沙参多糖可以通过提高巨噬细胞及淋巴细胞的增殖分化来提高机体的免疫功能,可以通过对淋巴亚群的作用,提高小鼠的T、B细胞、NK细胞等的活性,增强机体的非特异性及特异性免疫功能。