斯氏艾美耳球虫弱毒苗的制备及初步应用

作     者：矫千禾 

作者单位：吉林农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：赵权

授予年度：2021年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：斯氏艾美耳球虫 致弱疫苗 推广 

摘      要：兔球虫病对兔养殖行业造成的经济损失巨大。目前,对兔球虫的防治仍以化学合成药物为主,主要在饲料或饮水中加入抗球虫药物来预防,但长期使用会造成药物残留和耐药性的产生。因此,疫苗仍是抗球虫病的首选防治手段。本研究通过临床收集的兔球虫卵囊人工感染幼兔,28d剖杀后,在肝脏收集到一株球虫株,后经过复壮、不同方法致弱后观察体外孢子化率。以不同免疫剂量免疫幼兔,观察不同检测指标,选择最佳的兔球虫疫苗后,在吉林省兔场进行免疫保护性实验,进行效果观察。具体内容如下:1.通过离心沉淀法、饱和食盐水漂浮法和Sheater蔗糖溶液纯化方法对分离的斯氏艾美尔球虫进行纯化,根据球虫寄生部位、形态学、分子生物学方面鉴定,获得一株***球虫虫株。2.采用不同物理和化学方法对未孢子化卵囊进行预处理后在进行体外孢子化。结果表明,甲醛致弱组、化学致弱组、紫外线致弱组和超声波致弱组相比于阳性对照组,体外孢子化率差异均显著(P0.05),表现为致弱30d后,***体外孢子化率有较大降低趋势55.77±0.66%。将甲醛致弱剂组组内比较,差异显著(P0.05),但超声波组数值呈现最小数值,超声波组致弱后,6×10个/只,肝重指数最低2.21±0.33。肝功能指标结果显示,致弱四个试验组的肝功能8个指标分别于对照组相比,四个致弱组的ALT、AST、ALB、TBIL、LDH、ALP、GGT和CHE与阳性对照组相比,差异显著均差异显著(P0.05),说明兔的肝功能状态改善。将试4种不同致弱组进行比较,超声波组超声波组的肝功8个指标ALT、ALB、LDH、CHE相比于其他组,差异显著(P0.050),说明超声波组效果最好,超声波组组间肝功8个指标不同剂量相比,差异显著(P0.05),说明超声波组6×10个/只免疫剂量8个指标数值最低,分别为ALT(30.02±4.23)、AST(23.88±1.11)、ALB(21.43±4.12)、TBIL(2.65±0.01)、LDH(165.51±11.21)、ALP(52.19±2.13)、GGT(5.21±0.08)和CHE(148.19±1.66)免疫效果最好。ELISA实验显示试验组Ig G OD值血清随时间延长,总体呈现升高趋势(P0