温度胁迫对湖北钉螺体内能源物质及部分呼吸酶的影响

作     者：章琴 

作者单位：皖南医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：周书林

授予年度：2021年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主      题：湖北钉螺 温度胁迫 能源物质 琥珀酸脱氢酶 细胞色素氧化酶 

摘      要：目的:探索在实验室条件下,温度胁迫(高温和低温)情况下湖北钉螺体内蛋白质、脂肪、糖原和葡萄糖这四种能源物质含量的变化以及与有氧呼吸有关的两种主要酶——琥珀酸脱氢酶(SDH)和细胞色素氧化酶(CCO)的含量变化情况,以探索钉螺在温度胁迫过程中体内能源物质变化消耗情况以及有氧代谢水平,以期进一步完善环境胁迫(低温或者高温)状态下钉螺机体的生理学与生物化学变化等基础资料,为不断深入了解钉螺并进一步控制钉螺提供参考。方法:1.实验用钉螺采集于芜湖市湾沚区青弋江支流赵家河段江滩上。采集的钉螺带回实验室中,去离子水反复冲洗以去除表面泥土,放置在培养皿中常规饲养方法饲养3天,待用。将钉螺随机分成3组,分别为常温对照组(以下简称为对照组)、高温胁迫组(以下简称为高温组)和低温胁迫组(以下简称为低温组),每组组内再设3个平行组,组内分别编号为组1、组2和组3。低温组和高温组分别放入摇床中,通过控制摇床的温度使钉螺处于高温或低温胁迫状态。对照组室内饲养方法按粗草纸饲养法略加改进如下:将钉螺置于一定规格的搪瓷托盘内,托盘底部垫一层海绵,再加一层粗草纸,饲养过程中间断加入自然江水,使粗草纸始终保持一定的湿度,放置20℃室温下驯化、饲养,备用。2.将各组处理后的钉螺迅速置入-80℃冰箱中冷冻保存。取出钉螺,解冻后用镊钳十字交叉法压碎钉螺螺壳,体视显微镜下迅速解剖钉螺,剔除螺壳,取出软体组织并置于事先备好的EP管中。分组、称重并记录。根据各组实验要求,加入生理盐水或者PBS缓冲液等,用均质器打匀组织,各组贴上标签后放入-80℃冰箱中备用。3.按照试剂盒说明书或文献中的方法分别测定蛋白质、糖原、葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯以及细胞色素氧化酶和琥珀酸脱氢酶等各待测指标的含量。每组重复测定3次,取算术平均值。结果:1.湖北钉螺体内能源物质含量(1)对照、低温和高温组钉螺软体组织中蛋白质含量分别为(82.36±7.92)μg/mg、(58.42±0.74)μg/mg和(63.10±0.90)μg/mg,三组蛋白质含量不同,差异有统计学意义(F=22.341,P0.05)。(4)对照、低温和高温组钉螺软体组织中总胆固醇含量分别为(1.39±0.05)μg/mg、(1.16±0.09)μg/mg和(1.24±0.09)μg/mg,三组总胆固醇含量不同,差异有统计学意义(F=7.247,P0.05)。(5)室温、低温和高温组钉螺软体组织中甘油三酯含量分别为(5.29±0.45)μg/mg、(3.90±0.37)μg/mg和(7.35±0.55)μg/mg,三组甘油三酯含量不同,差异有统计学意义(F=42.484,P0.05)。2.温度胁迫下湖北钉螺体内两种主要呼吸酶含量影响的研究(1)对照、低温和高温组钉螺软体组织中细胞色素氧化酶含量分别为(27.11±2.31)μg/mg、(21.90±0.32)μg/mg和(21.42±1.84)μg/mg,三组细胞色素酶含量不同,差异有统计学意义(F=10.145,P0.05)。(2)对照、低温和高温组钉螺软体组织中琥珀酸脱氢酶含量分别为(1.30±0.002)μg/mg、(1.24±0.05)μg/mg和(1.12±0.02)μg/mg,三组琥珀酸脱氢酶含量不同,差异有统计学意义(F=24.624,P0.05)。结论:1.湖北钉螺在温度胁迫状态下,其软体组织中总蛋白、糖原和总胆固醇含量均降低。软体组织中甘油三酯含量有变化,低温下含量最低,高温时含量反而升高。软体组织葡萄糖含量保持相对恒定。2.温度胁迫状态下钉螺软体组织中CCO和SDH含量均有变化,高温胁迫或者低温胁迫均会使CCO和SDH两种酶含量下降。