HIV-1病毒载量检测实验室室间质量评价结果分析和国产试剂的检测性能评估

作     者：薛云鹏 

作者单位：中国疾病预防控制中心 

学位级别：硕士

导师姓名：金聪;肖瑶;潘品良

授予年度：2021年

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

主      题：室间质量评价 艾滋病病毒 病毒载量 国产试剂 试剂评估 

摘      要：研究背景:病毒载量检测是监测HIV-1感染者疾病进程,评价抗病毒治疗效果,调整治疗方案的重要指标。目前,虽然国内许多实验室已经将病毒载量检测纳入HIV感染诊断和治疗监测工作,但多数实验室开展工作的时间较短,经验不足。为保证病毒载量检测质量,中国疾控中心性病艾滋病预防控制中心参比实验室自2005年开始组织全国HIV-1病毒载量检测实验室室间质量评价工作。室间质量评价作为实验室检测质量的控制手段,通过发放标准质控品,分析和总结实验室存在的问题,对于提高实验室检测水平,使多中心研究中各实验现场的研究结果可比具有重要意义。长期以来,我国HIV-1病毒载量的实验室检测主要依靠罗氏或雅培等进口试剂,价格昂贵且仅能在配套设备上使用,难以满足国内大量增加的HIV-1病毒载量检测需求。近年来,随着国产HIV-1病毒载量检测试剂的自动化程度、检测质量和检测性能等的不断改进,国产试剂与进口试剂的差距逐渐缩小,部分城市和地区逐渐开始选择使用我国自主研发的HIV-1病毒载量检测试剂,推动了国内相关试剂的研发热潮。然而很多实验室对国产试剂的检测性能不了解,在病毒载量检测需求逐年增加的情况下,亟需对新上市的国产病毒载量检测试剂的检测性能进行评估。目的:1.通过对2005～2019年参评实验室反馈的HIV-1病毒载量检测结果进行分析,了解实验室检测结果的影响因素,为有针对性的提高我国HIV-1病毒载量检测实验室检测水平,保证检测质量提供数据参考。2.对我国自主研发的某HIV-1病毒载量检测试剂进行临床样本检测效果和检测性能的评估,为疾控机构和医疗机构在实际工作中选择使用国产HIV-1病毒载量检测试剂提供数据参考。方法:第一部分将2005～2019年参评实验室提交的病毒载量检测结果（拷贝/ml）进行log10对数转换,然后按照检测方法和样本编号进行分类,计算检测结果对数值的均值（M）与标准差（S）。根据《HIV-1病毒载量测定及质量保证指南》中的评分标准,获得不同实验室参与室间质量评价工作的考核成绩。通过卡方检验分析可能影响实验室考核成绩的因素。采用单因素分析法评价所用检测试剂种类,实验室机构类型,实验室所属地区经济状况及行政区划情况对实验室检测结果稳定性的影响,并将单因素分析有统计学意义的影响因素纳入多元线性回归分析模型。使用稳健变异系数（RCV）评价不同试剂检测结果的稳定性。采用Bland-Altman一致性分析法和回归分析法评价不同试剂检测结果的一致性和相关性,并对室间质量评价工作中常用的两种统计方法:四分位数稳健统计法和迭代稳健统计法作对比比较。第二部分将美国Rush大学提供的用于室间质量评价的原始质控品,使用健康人血浆作系列稀释,分析某国产病毒载量检测试剂的检测线性度和精密度。应用HIV-1感染者样本和阴性样本比较该国产试剂与进口罗氏Cobas Taqman病毒载量检测试剂检测结果的相关性和一致性。结果:第一部分***-1病毒载量检测实验室数目从2005～2019年不断增加,截至2019年底,全国已有31个省（自治区、直辖市）,267家实验室具备HIV-1病毒载量检测能力。四川、广西、河南及安徽等艾滋病负担较重的省份已经建立了县一级的病毒载量检测实验室。参评机构以疾控机构（69.66%）和医疗机构（28.46%）为主,军队系统（1.12%）、妇幼保健机构（0.37%）和第三方检测机构（0.37%）均有涉及,但数量较少。2.自2013年起,参评实验室的不合格率始终维持在较低水平（1.94～4.63%）,实验室总体处于良性运转状态,仍有少数实验室考核成绩不合格,建议实验室从检测仪器、内部管理程序、实验室环境、检测人员、试剂等方面查明不合格原因。参评实验室的地域分布情况是影响实验室考核成绩的因素（P0.05）。3.试剂种类及参与考核年限是影响实验室检测结果稳定性的因素（P0.05）,参与室间质量评价时长大于等于5年的实验室检测结果的稳定性更好。其他因素如实验室机构类型,实验室所处地区经济状况等均未发现对检测结果的稳定性有影响（P0.05）,提示经过培训和考核,基层实验室也可以开展HIV-1病毒载量检测工作。***、EasyQ、M2000和国产试剂是现阶段实验室使用的4种主要检测试剂。M2000（RCV分布范围为0.04%～7.49%）、Taqman（RCV分布范围为0.37%～15.86%）等基于实时荧光PCR技术的试剂检测结果的稳定性较好,国产试剂（RCV的分布范围为1.01%～49.97%）检测结果的稳定性略差。Bland-Altman分析结果表明,不同试剂获得的检测结果一致性较高,有多于85%的样本的检测结果落在检测一致性区间的95%上下限之间。进一步做回归分析,发现不同试剂获得的检测结果可以进行相互换算（P0.05）。5.四分