沉默Ebp1蛋白对胃癌HGC-27细胞增殖、侵袭和迁移的影响

作     者：路琪（PRAJAPATI ROCKEY） 

作者单位：延边大学 

学位级别：硕士

导师姓名：金头峰

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：胃癌 Ebp1基因 HGC-27细胞系 细胞增殖 凋亡 侵袭 上皮-间质转化 

摘      要：目的:Ebp1是Erb B3受体的主要结合蛋白之一,具有多种细胞功能包括凋亡、增殖和分化。研究表明Ebp1不同类型的癌症中表达,并在癌症的发展中起重要作用,Ebp1在胃癌细胞中也高表达,但其在胃癌中的确切作用仍不清楚。本研究探讨沉默Ebp1蛋白对胃癌HGC-27细胞增殖、侵袭和迁移的影响、为胃癌的诊断和预后提供实验依据。方法:本实验利用胃癌HGC-27细胞株,用重组慢病毒载体感染72小时观察细胞中Ebp1蛋白的沉默。实验分为两组:Ebp1沉默组（KD组）和无病毒感染对照组（NC组）。采用蛋白免疫印迹法检测两组细胞Ebp1蛋白表达,Ebp1蛋白表达显著降低表明转染成功。转染成功后用MTT法检测细胞活性,平板克隆实验检测细胞增殖能力和集落形成能力,流式细胞术检测细胞的细胞周期和凋亡,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,蛋白免疫印迹法检测细胞的上皮-间质转化相关蛋白的表达水平。结果1.蛋白质印迹检测结果显示:KD组Ebp1的表达明显低于NC组,表明成功构建了胃癌HGC-27细胞Ebp1的沉默。***检测结果显示:KD组比NC组细胞增殖能力明显减弱（*P0.05）。3.平板克隆法检测结果显示:KD组比NC组的克隆能力明显降低（***P0.001）。4.划痕实验结果显示:KD组的愈合能力明显低于NC组,表明Ebp1基因沉默后HGC-27细胞的迁移能力减弱。***小室法检测结果表明:KD组比NC组侵袭能力明显降低,表明Ebp1基因沉默减弱了HGC-27细胞的侵袭能力。6.流式细胞术检测结果显示:KD组G0/G1期细胞比例明显高于NC组,而S期和G2/M期细胞比例明显低于NC组,该结果表明沉默Ebp1之后,胃癌细胞发生细胞周期阻滞,细胞主要阻滞在G0/G1期。7.蛋白质印迹法检测结果显示:与NC组相比,KD组N-cadherin、Vimentin、Snail和Slug蛋白的表达降低,而E-cadherin的表达增加。E-cadherin蛋白的增加和Ncadherin、Vimentin、Snail和Slug蛋白的减少意味着上皮-间充质转变的减少。上皮-间质转化状态的降低,即KD组侵袭和转移活动的减少。结论:***1基因沉默减弱了HGC-27细胞的增殖、抑制了胃癌HGC-27细胞的侵袭和转移。***1诱导胃癌细胞的上皮-间质转化。