OAT1/3和P-gp介导的五酯胶囊对甲氨蝶呤药动学影响

作     者：付冉 

作者单位：河北医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：董占军

授予年度：2021年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：甲氨蝶呤 五酯胶囊 药物相互作用 转运体 

摘      要：第一部分五酯胶囊对大鼠体内甲氨蝶呤药代动力学影响目的:探讨单次和多次给予不同剂量的五酯胶囊对大鼠体内甲氨蝶呤药代动力学的影响。方法:建立测定大鼠血浆中甲氨蝶呤药物浓度的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)定量分析方法。将36只雄性SD大鼠按照体重随机分为6组:I组:单次0.5%羧甲基纤维素钠(0.5%CMC-Na)联合甲氨蝶呤对照组;II-III组:单次低/高剂量五酯胶囊联合甲氨蝶呤实验组;IV组:连续七天0.5%CMC-Na联合甲氨蝶呤对照组;V-VI组:连续七天低/高剂量五酯胶囊联合甲氨蝶呤实验组;按照低剂量五酯胶囊150mg/kg,高剂量五酯胶囊450 mg/kg,甲氨蝶呤2 mg/kg的剂量灌胃给药,于不同时间点大鼠眼内眦静脉丛取血,血浆经甲醇沉淀蛋白后用UPLC-MS/MS方法进行定量分析。采用非房室模型,利用DAS 2.1软件计算药物代谢动力学的统计矩参数。结果:甲氨蝶呤在1.03-515 ng/m L范围内线性关系良好,血浆样品方法学均符合要求。药代动力学结果表明,单次低剂量五酯胶囊对甲氨蝶呤药代动力学无影响;单次高剂量五酯胶囊可使甲氨蝶呤的AUC、C较对照组分别增加119%和79%,V和CL较对照组分别降低78%和56%;多次低剂量五酯胶囊可使甲氨蝶呤的CL降低34%;多次高剂量五酯胶囊可使甲氨蝶呤的AUC、C较对照组分别增加154%和61%,CL较对照组降低60%。结论:本实验建立了高效灵敏的UPLC-MS/MS方法,可用于测定大鼠血浆中甲氨蝶呤的浓度并应用于五酯胶囊对甲氨蝶呤药代动力学影响的研究。药代动力学结果表明,联合应用五酯胶囊可能会增加甲氨蝶呤体内的暴露量,应考虑药物间相互作用的可能。第二部分五酯胶囊对大鼠转运体表达的影响目的:考察五酯胶囊对大鼠肾脏OAT1/3及小肠P-gp的m RNA及蛋白表达水平的影响,从转运体的角度分析五酯胶囊造成甲氨蝶呤药动学改变可能的分子机制。方法:采用2%戊巴比妥麻醉大鼠,将采集的大鼠的肾脏及小肠置于-80℃保存备用。采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)以及蛋白质印迹法(Western blot)测定大鼠肾脏OAT1/3及小肠P-gp的m RNA及蛋白表达水平。结果:相较于对照组,低剂量五酯胶囊组OAT1/3及P-gp m RNA的表达无统计学差异,单次高剂量五酯胶囊给药组OAT1和P-gp的m RNA表达分别下降了57%和54%,OAT3 m RNA表达水平与对照组无统计学差异,多次高剂量五酯胶囊给药组OAT1和P-gp的m RNA表达分别下降了67%和64%,OAT3 m RNA表达水平与对照组无统计学差异;相较于对照组,单次给药组OAT1及OAT3的蛋白表达无统计学影响,单次低剂量、高剂量五酯胶囊给药组P-gp的蛋白表达分别下降了37%和66%,多次低剂量五酯胶囊给药组OAT1、OAT3以及P-gp的蛋白表达分别下降了64%、57%和45%,多次高剂量五酯胶囊给药组OAT1、OAT3以及P-gp的蛋白表达分别下降了81%、89%和83%。结论:五酯胶囊可抑制大鼠肾脏OAT1/3以及小肠P-gp转运体的表达。单次给药与多次给药对转运体表达影响趋势相同,五酯胶囊对转运体的抑制作用随给药剂量增加而增加,说明五酯胶囊可能通过下调肾脏OAT1/3的表达减少甲氨蝶呤在肾脏的排泄,下调小肠P-gp的表达减少甲氨蝶呤在小肠的外排,增加甲氨蝶呤在小肠的吸收,造成甲氨蝶呤的体内暴露量增加。