HPV16 E6重组质粒转染人皮肤鳞状细胞癌A431细胞模型的构建及鉴定

作     者：马庆宇 

作者单位：新疆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：梁俊琴

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：癌,鳞状细胞 HPV16 E6 A431细胞 机制 

摘      要：目的:HPV16机会性感染皮肤或粘膜基底层的角质形成细胞,遗传物质进入细胞核并与宿主基因整合是促成细胞发生恶变的重要因素。本研究旨在观察HPV16 E6重组质粒转染的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞、空载质粒转染的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞及空白对照组HPV16 E6基因、蛋白的表达差异。方法:第一部分:将成功构建的慢病毒质粒LV-OE-HPV16 E6用293T细胞包装后检测慢病毒的滴度;第二部分:(1)培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞,观察细胞生长状态,确定细胞指数生长期,绘制细胞生长曲线图;(2)用不同浓度嘌呤霉素溶液(0.5、1、1.5、2、2.5μg/m L)制备CCK-8实验,用来确定嘌呤霉素筛选成功转染慢病毒的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞的最佳浓度;(3)通过实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹技术分别检测三组细胞中HPV16 E6的m RNA及蛋白表达情况。结果:(1)LV-OE-HPV16 E6重组质粒包装成滴度为2×10TU/m L满足转染条件的慢病毒。(2)HPV16 E6重组质粒转染的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞的m RNA水平、蛋白表达量均显著高于空白对照组及空载质粒的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞(P0.05)结论:LV-OE-HPV16 E6慢病毒成功转染人皮肤鳞状细胞癌A431细胞,HPV16 E6基因及蛋白可在细胞中稳定表达。