Btk激酶在内毒素/脂多糖诱导烫伤小鼠肠道细胞焦亡中的作用

作     者：金煦 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈旭林

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

主      题：BTK 烧伤 脓毒症 焦亡 肠道损伤 

摘      要：目的:在大面积烧伤患者中,由于革兰氏阴性杆菌的感染,革兰氏阴性杆菌内毒素(LPS)大量释放入血导致脓毒症产生,患者发生严重的全身性炎症反应并造成多器官功能衰竭(MOF)。肠道是MOF的始动器官,其损伤与LPS诱导的细胞焦亡相关。细胞焦亡是一种新发现的细胞死亡方式,其发生依赖于细胞内炎症小体的激活和后续caspase蛋白家族的活化。布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)是非受体酪氨酸激酶家族的一员,作为Toll样受体(TLR)信号途径的组成部分,Btk信号在LPS介导的炎症反应中具有重要作用。但Btk信号在烧伤脓毒症相关肠道损伤中的作用并不清楚。本文旨在探讨Btk在LPS诱导的烫伤小鼠肠道细胞焦亡中的作用。方法:将128只C57BL/6小鼠分成正常对照组、烫伤组、LPS组、A13(3mg/kg)组、A13(10mg/kg)组、A13(30mg/kg)组。正常对照组小鼠予以37℃水浴15s进行模拟烧伤及生理盐水腹腔注射后处死;其余各组在小鼠的背部用水浴(100℃)恒温持续接触15s,计算烫伤面积10%TBSAⅢ度;随后LPS组通过腹腔注射LPS 10mg/kg,复制烧伤脓毒症模型。A13(3mg/kg)组、A13(10mg/kg)组、A13(30mg/kg)组除给予LPS外,分别给予不同浓度特异性Btk抑制剂LFM-A13。除正常对照组外,各组处理完成后分别于0h、12h、24h后处死,每个时相点均为8只动物。收集小鼠血液和肠道组织分类保存。用免疫组织化学技术检测p-Btk蛋白表达情况。采用蛋白质免疫印迹技术检测小鼠肠道p-Btk、Caspase 1、Caspase 11蛋白含量。采用酶联免疫吸附测定法检测小鼠肠道和血清IL-1β含量。总体比较行单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。P0.05为差异有统计学意义。结果:(1)在12h时,与正常对照组相比,烫伤组肠道未见Btk明显活化;LPS组出现Btk活化明显增加;A13(3mg/kg)、A13(10mg/kg)、A13(30mg/kg)肠黏膜随LF M-A13浓度增加Btk活化逐步下降。(2)与正常对照组比较,LPS组在12h和24h时,p-Btk含量均明显增加,差异有统计学意义(P0.05),但未在0h时观察到相同现象。A13(3mg/kg)、A13(10mg/kg)、A13(30mg/kg)组在12h和24h时均出现不同程度Btk活化被抑制而使p-Btk含量降低,以A13(30mg/kg)组抑制最为明显,差异有统计学意义(P0.05)。(3)与正常对照组比较,LPS组在12h和24h时,Caspase1、Caspase 11剪接体含量均明显增加,差异有统计学意义(P0.05),但未在0h时观察到相同现象。A13(3mg/kg)、A13(10mg/kg)、A13(30mg/kg)组在12h和24h时均出现不同程度Caspase 1、Caspase 11剪接体含量降低,以A13(30mg/kg)组抑制最为明显,差异有统计学意义(P0.05)。(4)与正常对照组比较,LPS组肠道、血清IL-1β含量均明显增加,差异有统计学意义(P0.05),以血清中IL-1β含量增加更为明显。A13(30mg/kg)组肠道、血清IL-1β含量相对于LPS组明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:烧伤脓毒症时,小鼠肠道Btk激酶活化,肠道出现严重炎症反应和损伤,同时肠道上皮细胞焦亡增加,抑制Btk激酶活化可抑制肠道细胞焦亡,保护小鼠肠道,减轻炎症反应,是烧伤脓毒症相关肠道损伤的一个潜在靶点。