草苁蓉环烯醚萜苷联合5-氟尿嘧啶对人肝癌HepG2、SK-Hep1、SMMC-7721细胞EMT的抑制作用

作     者：董学花 

作者单位：延边大学 

学位级别：硕士

导师姓名：尹学哲

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：草苁蓉环烯醚萜苷 肝细胞癌 5-氟尿嘧啶 上皮-间充质转化 

摘      要：目的:研究草苁蓉环烯醚萜苷（Iridoid glucosides from boschniakia rossica,IGBR）联合 5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-Fu）对人肝癌 HepG2、SK-Hep1、SMMC-7721 细胞上皮-间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响及其调节机制。方法:将对数生长期肝癌HepG2、SK-Hep1、SMMC-7721细胞株随机分为5组,对照组、模型组、IGBR组、5-FU组、联合组。对照组给予DMEM培养液处理48h;模型组采用10 ng/mL的TGF-β1诱导肝癌细胞 EMT 48h;IGBR 组给予 500 mg/mL 的 IGBR 和 10 ng/mL 的 TGF-β1诱导肝癌细胞EMT 48h;5-FU组给予75μg/mL的5-FU和10 ng/mL的TGF-β1诱导肝癌细胞 EMT 48h;联合组 500 mg/mL 的 IGBR、75 μg/mL的5-FU和10 ng/mL的TGF-β1诱导肝癌细胞EMT 48h。显微镜下观察细胞形态变化;MTT法检测细胞的存活率、黏附率;Western blot检测基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase,MMP）MMP2、MMP7、MMP9、Snail、Slug各种信号因子的表达;免疫荧光法检测钙粘附蛋白-E（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的定位及表达强度。结果:1.观察细胞形态变化可知,与对照组比较,模型组细胞呈长梭形,纤维样、纺锤样改变且细胞;与模型组比较,联合组HepG2、SK-Hep1、SMMC-7721肝癌细胞的形态改变减少;与联合组比较,5-FU组和IGBR组细胞形态改变增多。2.细胞存活率、黏附率结果可知:与模型组比较,5-FU组、IGBR组和联合组细胞存活率、黏附率降低（P0.05）;与5-FU组和IGBR组比较,联合组存活率、黏附率明显降低（P0.05）;*** Blot结果显示:与对照组比较,模型组TGF-β1可诱导MMP2、MMP7、MMP9、Snail、Slug 蛋白表达上调（P0.05）,与模型组比较,联合组MMP2、MMP7、MMP9、Snail、Slug蛋白表达下调（P0.05）;与联合组比较,5-FU 组和 IGBR 组 MMP2、MMP7、MMP9、Snail、Slug蛋白表达上调（P0.05）。4.免疫荧光结果显示:E-cadherin、Vimentin蛋白定位于细胞膜、细胞质中。与对照组比较,模型组E-cadherin荧光强度减弱,Vimentin荧光强度增强,与模型组比较,5-FU组、IGBR组和联合组E-cadherin荧光强度增强,Vimentin荧光强度减弱。结论:***联合5-Fu可以逆转肝癌HepG2、SK-Hep1、SMMC-7721 细胞 EMT 模型,抑制肝癌 HepG2、SK-Hep1、SMMC-7721细胞的增殖,降低细胞繁殖能力、黏附能力。*** 联合 5-Fu 通过下调 MMP2、MMP7、MMP9、Snail、Slug等转录因子的表达,增强E-cadherin荧光强度,降低Vimentin荧光强度抑制肝癌细胞EMT,这可能是抑制肿瘤EMT作用的一个机制。*** 联合 5-Fu 可以抑制肝癌 HepG2、SK-Hep1、SMMC-7721细胞EMT,其抑制肿瘤EMT程度比IGBR、5-Fu单药效果较强,可作为辅助抗肿瘤药物。