不同穴位对IBS大鼠肠功能的调节及相关核团神经元放电影响的研究

作     者：覃颖 

作者单位：北京中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：朱文莲;任晓暄

授予年度：2020年

学科分类：1005[医学-中医学] 100512[医学-针灸推拿学] 10[医学] 

主      题：肠易激综合征 电针 神经元电信号 VPL DMV 5-HT3A受体 

摘      要：目的本研究选择肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome,IBS)作为研究媒介,根据Bristol便型评分评价大鼠粪便性状,采用腹部回撤反射(AWR)、免疫组化检测法、多通道同步记录等技术,观察比较电针“足三里、“合谷和“大肠俞穴对IBS的肠道敏感性和动力两方面的不同症状、结肠内黏膜层和肌层5-HT3A受体的阳性表达的影响,以及大鼠丘脑腹后外侧核(VPL)和迷走神经背核(DMV)神经元放电活动的变化,探讨电针这三个不同部位、不同穴性和不同神经节段的穴位对IBS模型大鼠肠道敏感性和动力两方面症状的影响是否存在差异,并研究其相关机制。方法选用新生Wistar健康幼鼠80只,随机分为空白对照组、模型组对照组、足三里组、合谷组和大肠俞组,每组16只,除空白对照组外,其它4组均采用母子分离、醋酸灌肠结合结直肠球囊扩张刺激等方法联合制备IBS模型。2月后,从各组随机选取大鼠在VPL和DMV埋置电极,每组、各核团至少埋置成功3只。术后恢复一周,空白对照组和模型对照组不予针刺干预,另外三穴位组分别给予相应穴位的电针刺激,隔日一次,共5次。针刺结束后,根据Bristol评分记录大鼠粪便性状;通过AWR实验记录潜伏期、收缩波个数评价肠道敏感性和动力;采用免疫组织化学方法检测结肠黏膜层和肌层中5-HT3A受体的阳性表达情况;采用在体多通道同步记录技术对大鼠脑内VPL和DMV神经元放电情况进行观察。结果1电针“足三里、“合谷、“大肠俞穴对IBS模型大鼠粪便性状的影响Bristol粪便评分结果显示:电针前,与空白对照组相比,模型对照组与三穴位组的Bristol粪便评分明显升高(P0.01)。电针后,与模型对照组相比,三穴位组的Bristol粪便评分明显降低(P0.01);与足三里组相比,合谷组的Bristol粪便评分升高(P0.05);与合谷组相比,大肠俞组的Bristol粪便评分降低(P0.05),差异有统计学意义。2电针“足三里、“合谷、“大肠俞穴对IBS模型大鼠腹部回撤反射的影响腹部回撤反射检测结果显示:与空白对照组相比,模型对照组的潜伏期明显缩短、收缩波个数明显增多(P0.01),足三里组的潜伏期明显缩短(P0.01);与模型对照组相比,合谷组和大肠俞组的潜伏期明显延长、收缩波个数明显减少(P0.01),足三里组的潜伏期明显延长、波个数出现减少(P0.01,P0.05);与足三里组相比,合谷组和大肠俞组的潜伏期出现延长(P0.05),差异有统计学意义。3电针“足三里、“合谷、“大肠俞穴对IBS模型大鼠结肠黏膜层5-HT3A受体免疫反应物阳性表达的影响与空白对照组相比,模型对照组的结肠黏膜5-HT3A受体表达的平均光密度明显增多(P0.01),说明造模成功;与模型对照组相比,各个电针组的结肠黏膜5-HT3A受体表达的平均光密度明显减少(P0.01)。与足三里组相比,合谷组的结肠黏膜5-HT3A受体表达的平均光密度明显减少(P0.01);与合谷组相比,大肠俞组的结肠黏膜5-HT3A受体表达的平均光密度明显增多(P0.01),差异有统计学意义。4电针“足三里、“合谷、“大肠俞穴对IBS模型大鼠结肠肌层5-HT3A受体免疫反应物阳性表达的影响与空白对照组相比,模型对照组的结肠肌层5-HT3A受体表达的平均光密度明显增多(P0.01),说明造模成功;与模型对照组相比,各个电针组的结肠肌层5-HT3A受体表达的平均光密度明显减少(P0.01);与足三里组相比,合谷组和大肠俞组的结肠肌层5-HT3A受体表达的平均光密度明显增多(P0.01),差异有统计学意义。5电针“足三里、“合谷、“大肠俞穴对IBS模型大鼠VPL神经元放电的影响UnitⅠ:与空白对照组比较,模型对照组VPL神经元放电频率增加(P0.05)。与模型对照组比较,足三里组与合谷组放电频率出现减少(P0.05)。UnitⅡ:与空白对照组比较,模型对照组VPL神经元放电频率显著增加(P0.01)。与模型对照组比较,合谷组和大肠俞组放电频率出现减少(P0.01,P0.05)。与足三里组比较,合谷组和大肠俞组的放电频率均出现增多(P0.05)。6电针“足三里、“合谷、“大肠俞穴对IBS模型大鼠DMV神经元放电的影响Unit Ⅰ:与空白对照组比较,模型对照组的Ⅰ类神经元放电频率明显增加(P0.01),合谷组与大肠俞组的Ⅰ类神经元放电频率出现增加(P0.05)。与模型对照组比较,足三里组的Ⅰ类神经元放电频率减少(P0.05)。UnitⅡ:与空白对照组比较,模型对照组的Ⅱ类神经元放电频率明显增加(P0.01),大肠俞组的Ⅱ类神经元放电频率出现增加(P0.05)。与模型对照组比较,足三里组的Ⅱ类