不同节气下大学生过敏性鼻炎患者外周血中SLFN12基因甲基化水平变化规律的探究

作     者：李承贤 

作者单位：天津中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：袁卫玲

授予年度：2020年

学科分类：1005[医学-中医学] 100511[医学-中医五官科学] 10[医学] 

主      题：过敏性鼻炎 节气 DNA甲基化 过敏免疫 大学生 

摘      要：天人相应理论是中医学原创性的理论之一,该理论认为人和自然是一个有机的整体。生活在自然界中的人类深受气候、环境变化的影响,会产生一系列的生理病理改变。过敏性鼻炎（Allergic Rhinitis,AR）是一种常见的过敏性疾病,属于中医鼻鼽范畴。目前流行病学研究已证实,AR的发病与外界环境变化密不可分,但对与AR相关的过敏免疫指标研究多集中在免疫细胞和免疫分子水平,若能探索出该病随季节变化的规律,发现基因层面的效应指标,不论是对AR的预防还是治疗,都会起到积极的作用。本课题组前期已对春分、夏至、秋分、冬至（简称二分二至日）以及立春、立夏、立秋、立冬（简称四立日）时期AR免疫指标进行了相关研究,发现在这些节气中,AR的发病与四季六气的变化密切相关。在此基础上,本研究选取清明、小满、小暑、处暑、寒露、小寒六个节气,弥补测量时间点上的空白,通过对大学生群体中AR患者和健康人外周血中SLFN12基因甲基化水平及其它过敏免疫相关物质含量测定,探究不同节气下大学生AR患者外周血SLFN12基因甲基化水平变化规律,以期为临床防治该病提供一定试验依据。1目的通过检测不同节气中外周血SLFN12基因的甲基化水平,血清中IgE,IL-4,IL-13,IFN-γ以及外周血中EOS%、BAS%,来探究AR发病表观遗传学层面的变化规律,以期为大学生群体防治该病提供一定依据。2方法2.1对象与分组所有具有明确AR病史的过敏组志愿者及健康人志愿者均来自天津中医药大学和天津大学。每个节气检测40例（过敏组20例,健康组20例,两组均为男女各10例）,重复测量6节气（小满、小暑、处暑、寒露、小寒、清明）。分组标准:AR的诊断标准（参考2015年天津会议,中华医学会耳鼻咽喉头颈外科学分会鼻科学组制定的变应性鼻炎诊断和治疗指南）;过敏性鼻炎评分量表（Score For Allergic Rhinitis,SFAR）。纳入标准:（1）过敏组:年龄在18-30岁,志愿参加本试验,有明确AR诊断史或个体符合AR的诊断标准;在此基础上,采用国际通用的过敏性鼻炎评分量表,对其进行评价,得分大于等于7分,即符合入组条件,纳入过敏组。（2）健康组:年龄在18-30岁,没有鼻息肉、鼻窦炎、变应性症状。志愿参加本试验并在此基础上,采用国际通用的过敏性鼻炎评分量表,对其进行评价,得分低于7分,即符合入组条件,纳入健康组。排除标准:半年内接受过激素、抗组胺药物治疗及免疫治疗者,不入选疾病组;两组均排除不愿参与试验者以及具有严重的哮喘、心血管病史、自身免疫性疾病病史、精神病史、妊娠期或其他功能性、器质性、心理疾病患者。2.2检测方法AR患者与健康人外周血中SLFN12基因甲基化水平:采用Massarray法测定;AR患者与健康人血清中反应素抗体（IgE）和细胞因子（IL-4,IL-13,IFN-γ）的测定:采用ELISA法;AR患者与健康人外周血中EOS%,BAS%测定:采用全自动生化分析仪测定。3统计方法采用SPSS 23.0软件进行统计学分析,数据用均数±标准误表示。在进行分析前用末次观测值结转法补齐缺失值,而后应用两因素重复测量方差分析法进行研究并对不同指标进行相关性分析。4结果4.1不同节气人体外周血中SLFN12基因甲基化水平的变化情况本研究中,通过研究SLFN12基因各潜在甲基化位点不同节气的甲基化水平,发现（1）SLFN12-23片段上的-818bp处最具代表性。过敏组在不同节气间具有小寒处暑小满≈小暑≈寒露清明的趋势,其中小寒节气的甲基化水平显著高于其它节气（P0.01）;健康组在不同节气间具有小寒寒露小满小暑≈处暑清明的趋势,小寒节气的甲基化水平显著高于其它节气（小寒与寒露P0.05,与其它节气P0.01）;（2）在试验涉及的6个节气中,除处暑节气外,健康组的甲基化水平均高于同节气过敏组;（3）过敏组与同节气健康组相比较,在寒露节气存在显著性差异（P0.01）。4.2不同节气内人体血清中免疫分子含量的变化情况4.2.1血清IgE:过敏组IgE含量在不同节气间具有小满寒露小寒处暑清明小暑的趋势,小满显著高于小暑、处暑（P0.05）和清明（P0.01）;健康组IgE含量在不同节气间具有寒露小满处暑小寒清明小暑的趋势。4.2.2血清IL-4:过敏组IL-4含量在不同节气间具有清明小满小暑处暑小寒寒露的趋势,清明显著高于小寒（P0.05）;健康组IL-4含量在不同节气间具有小暑清明小寒寒露处暑小满的趋势,小暑显著高于小满（P0.05）。4.2.3血清IL-13:过敏组IL-13含量在不同节气间具有小暑小满处暑寒露清明小寒的趋势,其中小满显著高于清明、小寒（P0.01）和寒露（P0.05）,小暑显著高于清明、寒露和小寒（P0.01）,处暑显著高于清明和小寒（P0.01）,寒露显著高于清明和小寒（P0.01）;健康组IL-13含量在不同节气间具有小暑小满寒露处暑清明小寒的趋势,其中小暑显著高于小满、小寒（P0.01）和清明（P0.05）,处暑显著高于小寒（P0.05）,寒露显著高于清明（P0.05）与小寒（P0.01）。4.2.4血清IFN-γ:过敏组IFN-γ含量在不同节气间具有小满清明小寒处暑寒露小暑的趋势,小满显著高于小暑、寒露（P0.01）和处暑（P0.05）,清明显著高于寒露（P0.05）,小寒显著高于小暑（P0.05）和寒露（P0.01）;健康组IFN-γ含量在不同节气间具有小寒清明小满寒露处暑小暑的趋势,小寒显著高于小暑、处暑、c寒露（P0.01）。4.3不同节气内人体外周血中免疫细胞含量的变化情况4.3.1外周血中EOS%:过敏组EOS%含量在不同节气间具有小寒处暑寒露小满清明小暑的趋势;健康组EOS%含量在不同节气间具有小满小寒小暑处暑清明寒露的趋势。过敏组与同节气健康组相比较,在清明、寒露（P0.01）以及处暑、小寒（P0.05）存在显著性差异且在各节气中过敏组EOS%均高于健康组。4.3.2外周血中BAS%:过敏组BAS%含量在不同节气间具有小满清明寒露处暑小寒小暑的趋势;健康组EOS%含量在不同节气间具有小满清明小寒寒露处暑小暑的趋势,小满显著高于小暑、处暑节气（P0.05）。此外,各节气中过敏组BAS%均高于健康组。4.4 SLFN12基因甲基化水平与AR免疫相关指标相关性分析过敏组SLFN12基因转录起始位点上游-818bp处甲基化水平在清明节气与BAS%（r=0.538,P0.05）存在正相关关系。5结论（1）SLFN12基因甲基化水平在AR发病中存在节气变化规律,于小寒节气达到峰值,提示AR冬季高发,且SLFN12基因转录起始位点上游-818bp可能是衡量AR严重程度的分子标志之一,从而在基因层面充实了中医“天人相应理论的内涵。（2）AR的发病具有免疫学基础且存在节气变化规律,即小满节气AR患者免疫功能亢进。（3）SLFN12基因甲基化水平在清明节气与BAS%存在显著性的正相关关系,其与过敏免疫指标的相关性仍需进一步研究。