一株饲用枯草芽孢杆菌的体外研究

作     者：韩旭凯 

作者单位：华东理工大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王学东;李振海

授予年度：2020年

学科分类：090502[农学-动物营养与饲料科学] 081703[工学-生物化工] 0905[农学-畜牧学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 09[农学] 

主      题：抗菌性能 枯草芽孢杆菌 益生菌 发酵优化 

摘      要：本文研究了从土壤中分离获得的枯草芽孢杆菌K12菌株的抗菌活性和益生菌特性。含有抑菌物质的K12菌株培养物的无细胞上清液（CFS）对溶藻弧菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特菌等常见致病菌表现出良好的抑制作用,同时也对真菌（白色念珠菌,根瘤菌,曲霉菌）生长表现出抑制作用。经30min 60℃和100℃,pH 4、pH 10、蛋白水解酶和去污剂处理后,CFS酸化沉淀复溶后仍具有抗细菌活性。经过大孔吸附树脂的吸附,C18疏水柱的分离纯化,分离出三种具有CFS抑菌作用的活性成分。LC-ESI-MS/MS鉴定分析,这三种抑菌活性成分是三族脂肽,分别为Surfactins,Itulins和Fengycins。此株枯草芽孢杆菌还具有优良的淀粉酶活性、纤维素酶活性、蛋白酶活性、几丁质酶活性和壳聚糖酶活性。CFS对真菌的抑制活性是由其中的几丁质酶和壳聚糖酶裂解真菌的细胞壁进而导致其死亡造成的,加热失活后丧失抑制活性。经抗生素抗性检验等安全性验证,此株枯草芽孢杆菌是生物安全的。本研究还对K12菌株产酶和抑菌性能的发酵条件进行了优化,以期在不同应用环境下达到最佳的使用效果。由此认为枯草芽孢杆菌K12是具有优良益生菌潜力的菌株,可作为饲料添加剂广泛地应用于养殖行业。