ATG7沉默影响卵巢癌SKOV3细胞顺铂化疗敏感性的研究

作     者：张璇 

作者单位：蚌埠医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：李艳华

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：卵巢癌 顺铂 RNA干扰 自噬 自噬相关基因7 

摘      要：目的:研究小干扰RNA(siRNA)诱导的自噬相关基因7(ATG7)沉默对卵巢癌SKOV3细胞顺铂(DDP)化疗敏感性的影响。方法:***法选取顺铂作用于卵巢癌SKOV3细胞系的条件。2.活性氧(ROS)检测试剂盒检测应用不同浓度顺铂时卵巢癌SKOV3细胞系产生的活性氧水平。*** blot检测应用不同浓度顺铂时卵巢癌SKOV3细胞系自噬相关蛋白Beclin-1、P62、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和ATG7的表达水平。4.应用siRNA技术使卵巢癌SKOV3细胞系中ATG7基因沉默,Western blot检测siRNA对卵巢癌SKOV3细胞系中ATG7基因的干扰效果。***法检测siRNA-ATG7干扰前后顺铂对卵巢癌SKOV3细胞系存活率的影响。*** V-FITC/PI双染法检测siRNA-ATG7干扰前后顺铂对卵巢癌SKOV3细胞系凋亡率的影响。7.线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测siRNA-ATG7干扰前后顺铂对卵巢癌SKOV3细胞系早期凋亡的影响。8.应用倒置显微镜观察siRNA-ATG7干扰前后顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞系细胞形态的变化。结果:***结果示,不同浓度顺铂(2,4,7,9,10,20,40,60μg·mL)对卵巢癌SKOV3细胞系的增殖抑制作用具有浓度和时间依赖性,顺铂浓度为4μg·mL作用细胞24h时,细胞存活率为52.71%±0.03。2.活性氧(ROS)检测结果示,应用不同浓度顺铂(0,2,4,8μg·mL)时卵巢癌SKOV3细胞系产生的活性氧增多。*** blot检测结果示,应用不同浓度顺铂(0,2,4,8μg·mL)时卵巢癌SKOV3细胞系自噬相关蛋白Beclin-1,ATG7表达水平增强,P62表达水平降低,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值增加。*** blot检测结果示,siRNA对卵巢癌SKOV3细胞系中ATG7基因的干扰效果明显。***法检测结果示,较siRNA-ATG7干扰前,干扰后顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞系存活率明显降低至41.7%±0.01,明显低于阴性对照组的细胞存活率(54.0%±0.01)(P0.05)。*** V-FITC/PI双染法检测结果示,较siRNA-ATG7干扰前,干扰后顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞系凋亡率明显增加。7.线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测结果示,较siRNA-ATG7干扰前,干扰后顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞系早期凋亡率明显增加。8.倒置显微镜观察结果示,较siRNA-ATG7干扰前,干扰后顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞系中细胞密度显着降低,细胞间间隙扩大,悬浮细胞数量显着增加,细胞质体积减少,细胞逐渐缩小、变圆并失去其正常形态,边界模糊。结论:1.自噬可能与卵巢癌SKOV3细胞的顺铂化疗耐药性有关。2.通过沉默自噬相关基因ATG7可以增强卵巢癌SKOV3细胞对顺铂化疗的敏感性。