双孢蘑菇还原型菌种的研制及覆土新技术研究

作     者：杨潜龙 

作者单位：河南农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邱立友

授予年度：2017年

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090202[农学-蔬菜学] 

主      题：双孢蘑菇 还原型菌种 恶臭假单胞菌 覆土材料 

摘      要：双孢蘑菇(Agaricus bisporus)是全世界栽培范围最广,生物学研究最深入,栽培技术最现代化,单位面积产量和世界总产量最高、消费量最大的食用菌。双孢蘑菇栽培主要使用谷粒种或其他配方的固体菌种进行接种。新近出现的还原型液体菌种,以其制作周期短、活力强、接种量大等优点,并且克服了液体菌种不耐储存、抵抗外界不良环境能力差等缺点,已经应用于金针菇和杏鲍菇生产。本研究旨在探索开发还原型液体菌种,以及替代材料中添加1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶产生菌恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)UW4代替常规覆土等新技术,实现双孢蘑菇的高效栽培。主要结果如下:1、液体菌种培养条件优化。以液体培养中菌丝球的生物量、菌球状态为指标,通过单因素试验,确定培养料浸提液添加量(X1)、过氧化钙浓度(X2)、装液量(X3)为影响液体菌种培养的三个重要因素,采用响应面法进行优化,利用Design-Expert软件中的Box-Behnken设计的响应面分析法建立模型:Y=+8.311E-003-6.950E-005X-9.437E-005X-7.996E-004X+4.150E-005XX+1.270E-004XX+2.823E-004XX-3.225E-006X-1.648E-005X2+8.153E-005 X2.推测出培养料浸提液添加量为50%,过氧化钙浓度为0.01 g/100 ml,装液量为80 ml,在此条件下,双孢蘑菇液体培养的菌丝生物量干重预测的最大响应值为0.009787 g/ml。此优化配方包含在试验处理中,实际值为0.0095 g/ml,与预测值相符。2、还原型菌种制备。从多种成胶物质中选出胶Y,在常温下固化效果最好,在其浓度为0.4%条件下,固化液体培养得到的菌丝球,4℃保藏。固化30 d后,将菌种液化接种于灭菌培养料平板中培养,在培养料中的生长速度比加富PD(PBG)培养基提高49.8%-77.9%。3、覆土新技术研究。共设计12个覆土处理,分别为常规覆土处理、常规覆土添加菌剂、常规覆土灭菌后添加菌剂、草炭土处理、草炭土添加菌剂处理、草炭土灭菌处理、草炭土灭菌后添加菌剂、生物炭灭菌处理、生物炭灭菌后添加菌剂、膨化珍珠岩灭菌处理、膨化珍珠岩灭菌后添加菌剂、蛭石灭菌添加菌剂。菌剂为恶臭假单胞菌UW4制剂,添加量为5%。每个处理3个小区,每个小区面积约为4 m,随机分布。前二潮菇产量,草炭土处理最高,生物炭和生物炭加菌剂处理产量最低,其次是珍珠岩处理。其他处理与常规覆土没有差异。表明采用资源丰富的蛭石或珍珠岩添加UW4菌剂可以作为覆土替代材料。4、覆土中1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶产生菌对菇产量的影响。在双孢蘑菇二潮出菇采收后,对不同覆土材料中1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶产生菌数量进行测定,其菌数的对数值与前两潮菇的总产量之间表现出极显著(P0.01)的正线性相关关系,表明覆土材料中ACC脱氨酶产生菌的数量越大,一潮与二潮菇的总产量也越高。