高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型及临床表型分析

作     者：麦颖 

作者单位：广州医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：吴爱武;卓超

授予年度：2019年

学科分类：100208[医学-临床检验诊断学] 1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：高毒力肺炎克雷伯菌 荚膜血清型 耐药率 临床资料分析 

摘      要：近年肺炎克雷伯菌在临床分离率及耐药率均出现增长,而且耐药株有出现泛耐药的苗头,因此,本研究选择肺炎克雷伯菌作为试验对象,通过对其血清型和耐药性情况等进行检测和分析,了解其流行情况,研究其毒力机制和耐药特点,为加强院内感染控制,遏制其流行提供实验室数据。目的:与典型肺炎克雷伯菌（classic Klebsiella pneumoniae,cKP）不同,高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulent Klebsiella pneumoniae,HvKP）多来源于社区,能使健康的年轻个体致病,且具有较强的播散能力。本研究通过系列实验并统计分析相关实验结果,以期能明晰广州医科大学附属第一医院临床分离的HvKP和cKP菌株的耐药性、血清分型和临床特征,并探讨实验室高毒力与临床高致病性之间是否等同。方法:1、菌株收集:广州医科大学附属第一医院2016年1月至2018年6月住院患者各种标本来源分离、并由基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI—TOF—MF）鉴定的肺炎克雷伯菌。拉丝试验阳性的菌株确认为高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulent Klebsiella pneumoniae﹐HvKP）,反之为普通肺炎克雷伯菌（classic Klebsiella pneumoniae﹐cKP）。统计HvKP与cKP的比例,以及在不同来源包括呼吸道标本、血标本、尿标本、胸腹水及引流液之间HvKP与cKP的比例。2、用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）检测高毒力菌株相关血清型（K1、K2、K5、K20、K54、K57）基因。了解临床检出的HvKP与cKP血清型构成,以及在各种标本中不同血清型检出情况。3、使用VITEK 2全自动微生物鉴定仪及纸片扩散法（Kirby-Bauer,K-B）对所有菌株进行药敏试验,按HvKP与cKP分组进行耐药情况比较,同时分析高毒力相关两组血清型K1与K2的耐药情况。4、采用查阅病史资料的方式对HvKP与cKP两组患者进行病历临床信息的统计及回顾性分析。由于HvKP主要从血标本和无菌体液中分离,因此查阅病史资料时主要选取血标本和无菌体液来源的KP患者进行病历临床信息的分层分析。结果:共分离非重复株肺炎克雷伯菌390株,其中来自呼吸道标本的占68.5%（267/390）,来自胸腹水及引流液的占10%（39/390）,来自尿标本的占8.9%（35/390）,来自血标本的占7.2%（28/390）,来自其他标本的占5.4%（21/390）。拉丝试验确定HvKP合计142株,占36.4%（142/390）,cKP有248株,占63.6%（248/390）。HvKP菌株来源分布:呼吸道标本占54.9%（78/142）,血标本占17.6%（25/142）,胸腹水及引流液占14.1%（20/142）,尿标本占4.9%（7/142）。cKP菌株来源分布:呼吸道标本占77.8%（193/248）,尿标本占10.9%（27/248）,胸腹水及引流液占7.6%（19/248）,血标本占1.2%（3/248）。142株HvKP中高毒力相关荚膜血清型阳性的占73.9%（105/142）,其中K1型占21.8%（31/142）、K2型占22.5%（32/142）、K57型占15.5%（22/142）、K5型占8.5%（12/142）。248株cKP中高毒力相关荚膜血清型阳性占9.7%（24/248）,其中K2型占7.3%（18/248）、K57型占1.6%（4/248）。对142株HvKP及248株cKP进行药敏分析。HvKP对碳氢酶烯类、青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类药物耐药率明显低于cKP。K1与K2型菌株药敏结果比较显示,K1型菌株对β内酰胺类加酶抑制剂、碳氢霉烯类、氨基糖苷类、喹诺酮类药物耐药率均为0,且对多种抗菌药物的耐药率均低于K2型。142株HvKP及248株cKP的相关临床资料回顾性分析显示,两组菌株来源在疾病、科室分布上有一定规律,肝脓肿和糖尿病是HvKP的危险因素,HvKP主要来源于社区获得性感染,而cKP则以院内感染居多。HvKP能引起多部位感染,具有迁移性。两组病人在住院时间、入住ICU时间、出现感染性休克、14天死亡率及28天死亡率的比较上没有差异。血标本和无菌体液来源的KP共67株,其中HvKP45株、cKP22株,从实验室指标、住院时间、入住ICU时间及比例、休克与否、预后转归、死亡率等资料来看,感染HvKP患者与感染cKP患者两者并无区别。结论:HvKP荚膜血清型以K1、K2和K57型多见,这类菌株对多种常用抗生素耐药率明显低于cKP。高毒力相关K1血清型KP对多种常用抗生素耐药率明显低于K2型。从本研究现有HvKP与cKP患者临床资料比较发现,HvKP感染者的病程比cKP感染者短,两组死亡率并没有差异。实验室检出的HvKP表型与其临床感染的致病力关系有待考究。