秩边透水道针法对早发性卵巢功能不全大鼠性激素及Bcl-2、Bax表达的影响研究

作     者：司佳弘 

作者单位：山西中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：金晓飞

授予年度：2020年

学科分类：1005[医学-中医学] 100512[医学-针灸推拿学] 10[医学] 

主      题：早发性卵巢功能不全 秩边透水道 AMH INHB Bcl-2 Bax 

摘      要：目的:以腹腔注射环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）诱导早发性卵巢功能不全（Premature ovarian insufficiency,POI）大鼠模型,并运用秩边透水道针法对其进行干预。观察治疗后各组大鼠卵巢病理变化、血清性激素水平及卵巢中bcl-2和bax蛋白含量变化,阐明秩边透水道针法对POI大鼠卵巢功能的影响,为临床治疗早发性卵巢功能不全提供更为有效的治疗手段,同时扩大秩边透水道针法的治疗范围。方法:筛选有正常动情周期雌性SD大鼠60只,八周龄体质量（200±20）g,随机分为空白组、模型组、秩边组（秩边透水道）、普通针刺组（肾俞、关元、三阴交）、西药组（戊酸雌二醇组）,每组12只。除空白组外,其余四组通过连续十五日腹腔注射环磷酰胺造模,于造模结束前连续十天取大鼠阴道涂片,以剔除动情周期无变化大鼠。于造模次日开始进行治疗,普针组和秩边组采取隔日针刺治疗,西药组每日采取戊酸雌二醇灌胃治疗,模型组和空白组在针刺组进行治疗的同时固定束缚,所有组治疗周期均为一月。治疗结束后统一取材,酶联免疫法检测血清中E2、FSH、LH、AMH、INHB的含量,分别用免疫组化法和免疫印迹法检测卵巢中bcl-2和bax蛋白的表达,并通过HE染色观察卵巢中卵泡及卵巢组织结构的变化。结果:1.大鼠一般情况:造模后,所有造模组大鼠的体重均有明显下降,与空白组相比差异显著（P0.05）。造模组大鼠饮水量增加,饮食量减少,出现便质稀溏,毛色暗淡、干枯,不喜动,部分出现大鼠颈后和头顶部脱毛明显。造模结束后阴道涂片检测结果显示各造模组大鼠动情周期紊乱明显。2.各组大鼠血清激素水平:模型组大鼠血清中FSH、LH含量显著上升,E2含量显著下降,与空白组相比差异有显著统计学意义（P0.05）。秩边组大鼠血清FSH和LH水平降低且E2水平明显升高,与模型组相比差异有显著统计学意义（P0.05）。模型组大鼠血清中AMH、INHB含量显著降低,与空白组相比差异有显著统计学意义（P0.01）。与模型组相比,秩边、西药组大鼠血清中AMH、INHB水平上升上升明显,差异有显著统计学意义（P0.01）。秩边组大鼠血清中AMH和INHB含量较其他治疗组上升明显（P0.01）。3.各组大鼠卵巢中bcl-2和bax蛋白表达:（1）bcl-2:模型组中bcl-2蛋白表达明显降低,与空白组相比差异有显著统计学意义（P0.05）,与模型组相比,各治疗组中蛋白表达均有不同程度的升高,秩边组和西药组中bcl-2蛋白含量与其相比差异显著（P0.05）;秩边组与西药组中bcl-2蛋白差异无显著统计学意义（P0.05）。（2）bax:模型组中bax蛋白呈现高表达,与空白组相比,差异有显著统计学意义（P0.01）;各治疗组中bax蛋白表达均较模型组有不同程度的降低,西药组、秩边组、普针组中bax蛋白表达与其相比均有显著差异（P0.05）;与秩边组相比,空白组、西药组中蛋白表达与其差异无显著统计学意义（P0.05）。4.卵巢组织及卵泡的变化:空白组大鼠卵巢形态饱满,颜色红润,卵巢中可见各级生长卵泡和黄体,闭锁卵泡数量少;模型组大鼠卵巢体积较小颜色暗淡发灰,卵巢中闭锁卵泡明显增多,生长中卵泡几不可见;秩边组大鼠卵巢体积、外观与空白组无显著差异,颜色较模型组红润,但不及空白组鲜艳,卵巢中可见正常发育的生长卵泡和黄体,空泡状卵泡和闭锁卵泡数量明显减少,卵巢结构与正常组相似。结论:1.秩边透水道针法能够有效改善早发性卵巢功能不全大鼠卵巢功能及卵泡质量。2.秩边透水道针法能够有效调节早发性卵巢功能不全大鼠血清中激素水平,降低大鼠血清中FSH、LH水平,升高E2、AMH和INHB水平,促使HPOA轴恢复平衡。3.秩边透水道针法对早发性卵巢功能不全大鼠的调节治疗作用是通过抑制卵巢中颗粒细胞的凋亡实现的,本针法能够有效调节POI大鼠卵巢中bcl-2和bax蛋白表达。