木犀草苷通过ROS/ADMA/DDAHⅡ/eNOS/NO途径保护血管内皮细胞免受铁过载损伤

作     者：陈淑平 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：何明

授予年度：2020年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：木犀草苷 铁过载 内皮功能障碍 线粒体 ROS/ADMA/DDAHⅡ/eNOS/NO途径 

摘      要：目的:铁过载引起的内皮功能障碍可能与过量的活性氧(ROS)产生有关,并且已经发现抗氧化剂可以减轻ROS引起的损伤。木犀草苷(Lut)是一种黄酮类化合物,具有抗氧化和清除自由基的能力。但是,尚未研究Lut是否可以保护HUVECs免受铁过载损伤及其潜在机制尚不清楚。因此,在这项研究中,我们探究Lut是否通过ROS/ADMA/DDAHⅡ/eNOS/NO途径对抗铁过载诱导的HUVECs损伤。方法:本实验以HUVECs为研究对象,50μM右旋糖酐铁(iron)处理细胞48 h以构建铁过载损伤模型。采用CCK-8法检测细胞存活率;分光光度法检测线粒体通透性转换孔(mPTP)的开放程度、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量;Western blotting法检测DDAHⅡ、eNOS、p-eNOS、cleaved-caspase3及线粒体/胞浆中cyt c的表达;荧光标记流式细胞法检测细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)、细胞及线粒体内活性氧(ROS);TUNEL法检测细胞凋亡及HPLC法测定细胞内ADMA、DDAHⅡ含量。结果:与50μM iron处理的HUVECs相比,40μM Lut增加了细胞存活率,SOD和GSH-Px活性,并降低了LDH活性和MDA水平;40μM Lut降低了细胞内ADMA含量,上调了DDAHⅡ的表达和活性,并增加了p-eNOS/eNOS比率和NO水平;40μM Lut明显抑制了细胞和线粒体内ROS的产生,稳定了MMP,抑制了mPTP的开放,阻止了cyt c从线粒体释放到细胞质中,降低了cleaved-caspase3的表达,最终改善了铁过载诱导的细胞凋亡。然而,加入pAD/DDAHⅡ-shRNA腺病毒逆转了Lut上述保护作用。此外,本研究建立L-精氨酸(L-Arg,ADMA竞争性底物),环孢菌素A(CsA,mPTP阻滞剂)和依达拉奉(Eda,自由基清除剂)作为阳性对照。Lut的作用类似于L-Arg,CsA和Eda的作用。结论:木犀草苷可以通过ROS/ADMA/DDAHⅡ/eNOS/NO途径保护HUVECs免受铁过载损伤,并且可能是治疗铁过载的潜在药物。