商陆皂苷甲对MRL/lpr小鼠肾炎疗效及CD19+IL-35+Breg细胞、IL-35表达的影响

作     者：曾慧林 

作者单位：遵义医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张祥贵

授予年度：2020年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：商陆皂苷甲 系统性红斑狼疮 狼疮性肾病 MRL/lpr小鼠 CD19+IL-35+Breg细胞 IL-35 

摘      要：目的:通过观察商陆皂苷甲(EsA)对MRL/lpr小鼠体内CD19IL-35Breg细胞、IL-35等细胞因子表达的影响,探究EsA对狼疮性肾炎可能的治疗机制。方法:选取24只SPF级MRL/lpr小鼠(雌性、已发病),随机分为模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组,每日通过腹腔注射分别给药,每组分别给药4周。4周后收集小鼠血液标本并处死小鼠,收集肾组织、脾脏组织。称小鼠体重和脾脏重量计算脾脏指数;HE染色、Masson+PASM染色观察肾脏病理变化,并进行狼疮性肾炎活动性指数(acute index,AI)评分;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-10、IL-17、IL-35表达水平;流式细胞术检测脾脏CD19IL-35Breg细胞比例;数据采用SPSS 21.0行统计学分析,P≤0.05认为有统计学意义。结果:1.一般情况:用药前各实验组MRL/lpr小鼠摄食、活动正常,毛发正常;随着实验进行,对照组、EsA+IL-12p35抗体组小鼠逐渐出现精神疲倦,摄食、活动减少,呼吸急促、毛发脱落、斑秃样皮肤损伤伴结痂形成。EsA治疗组摄食、活动较前无明显改变,仅毛发较前稀疏,光泽度较前下降。2.脾脏指数:模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组MRL/lpr小鼠脾脏指数分别为228.12±11.8mg/g、191.69±10.75mg/g、134.47±7.64mg/g,三组两两比较,差异有统计学意义(P0.05)。3.肾脏病理:光学显微镜下观察模型对照组MRL/lpr小鼠病理表现为:肾小球系膜细胞、内皮细胞重度弥漫性增生,肾小球内可见大量免疫复合物沉积,细胞纤维性新月体、环状体形成;肾间质可见弥漫性淋巴细胞和单核细胞浸润。EsA+IL-12p35抗体组小鼠肾组织病理表现:肾小球系膜细胞、内皮细胞中-重度增生,肾小球内可见大量免疫复合物沉积,少见新月体、环状体形成;肾间质弥漫性淋巴细胞和单核细胞浸润。EsA组肾脏病理表现为:肾小球系膜细胞、内皮细胞轻度增生,肾小球内可见免疫复合物沉积,少见新月体形成;肾间质局灶性淋巴细胞和单核细胞浸润。采用Austin评分系统对各组小鼠肾脏狼疮活动性指数进行评分,模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组MRL/lpr小鼠AI指数分别为:10.25±1.22、8.38±0.79、4.81±1.07,三组两两比较,差异有统计学意义(P0.05)。***/lpr小鼠脾脏中CD19IL-35Breg细胞比例:模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组MRL/lpr小鼠脾脏中CD19IL-35Breg细胞比例分别为:0.13±0.05%、0.35±0.16%、1.19±0.30%,三组两两比较,差异有统计学意义(P0.05)。***/lpr小鼠血清中IL-10、IL-35、IL-17水平:模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组MRL/lpr小鼠血清中IL-10水平分别为:63.30±12.83pg/ml、101.34±21.67pg/ml、137.40±22.86pg/ml,三组两两比较,差异有统计学意义(P0.05)。模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组MRL/lpr小鼠血清中IL-35水平分别为:116.04±13.86pg/ml、129.56±12.22pg/ml、141.96±5.83pg/ml,三组两两比较,差异有统计学意义(P0.05)。模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组MRL/lpr小鼠血清中IL-17水平分别为:17.90±1.89pg/ml、14.70±1.81pg/ml、12.54±0.94pg/ml,三组两两比较,差异有统计学意义(P0.05)。***相关及直线回归分析:MRL/lpr小鼠血清中IL-35水平与IL-10水平呈正相关(r=0.906,P0.05);MRL/lpr小鼠血清中IL-35水平与CD19IL-35Breg细胞比例呈正相关(r=0.667,P0.05);MRL/lpr小鼠血清中IL-35水平与IL-17水平呈负相关(r=-0.954,P0.05)。对MRL/lpr小鼠血清中IL-35与IL-10、IL-17、CD19IL-35Breg做直线回归分析,MRL/lpr小鼠外周血IL-35(X)与IL-10(Y)之间回归方程为Y=-177.75+2.2X,具有统计学意义(P0.05);小鼠外周血IL-35(X)与IL-17(Y)之间回归方程为Y2=37.14-0.17X,具有统计学意义(P0.05);小鼠外周血IL-35的表达水平与CD19IL-35Breg细胞比例之间回归方程为Y=-2.3+0.02