左归丸联合西曲瑞克经SIRT1/P53/P21通路平衡卵泡氧化应激反应改善环磷酰胺所致的卵巢储备下降的实验研究

作     者：李清瑜 

作者单位：暨南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：秦佳佳

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100211[医学-妇产科学] 10[医学] 

主      题：左归丸 西曲瑞克 卵巢储备下降 氧化应激反应 SIRT1/P53/P21通路 

摘      要：目的:观察补肾养阴方药左归丸联合促性腺激素释放激素拮抗剂西曲瑞克对平衡卵巢局部的氧化应激反应的作用,研究该中西结合的方法对改善环磷酰胺所致的卵巢储备下降的机制。方法:雌性ICR小鼠共分为空白组(A组)、模型组(B组)、西曲瑞克组(C组),左归丸组(D组)、中西结合组(E组),从实验第一天开始称为d1,实验最后一天是d38。d1-d5予C组和E组腹腔注射西曲瑞克混悬液,其余三组予腹腔注射生理盐水;d6-d10予B、C、D、E组环磷酰胺腹腔注射,A组予生理盐水腹腔注射;d11-d38予D组和E组左归丸颗粒剂混悬液灌胃,其余三组纯水灌胃。ELISA法检测卵巢匀浆中FSHR、LH、AMH、GDF-9、BDNF、LIF、NO、NOS、ROS、ATP水平,检测外周血中FSH、E水平,免疫组化法检测p53、p21、SIRT1蛋白在卵巢中的表达。结果:1.体重:空白组体重在实验周期38天内平稳增长,其余组别在d6后持续快速下降,动物出现脱毛、萎靡不振、大便稀薄等现象;从d11开始,西曲瑞克组、左归丸组、中西结合组体重开始回升,到d38左归丸组几乎恢复到与空白组相同的体重水平,西曲瑞克组与中西结合组的体重也得到一定恢复;模型组的体重一直在快速下降。2.动情期及动情间期:与空白组对比,模型组的动情期天数明显减少(P0.05);三个治疗组的闭锁卵泡与模型组相比有下降,但差异未达到统计学意义(P0.05)。4.免疫组化结果显示:SIRT1:与空白组对比,模型组SIRT1蛋白表达明显减少。与模型组对比,三个治疗组的SIRT1蛋白表达增加,其中左归丸组和中西结合组较为明显。P53:与空白组对比,模型组P53蛋白表达明显增多。与模型组对比,西曲瑞克组和左归丸组P53蛋白表达减少,中西结合组的P53蛋白表达则明显减少,接近空白组水平。P21:与空白组对比,模型组P21蛋白表达明显增多。与模型组对比,西曲瑞克组和左归丸组P21蛋白表达减少,中西结合组的P21蛋白表达明显减少,接近空白组水平。***法检测各组血清及卵巢局部激素及AMH水平显示:血清FSH:模型组的血清FSH水平比空白组显著上升,组间差异有统计学意义(P0.05),三个治疗组的E浓度比模型组显著上升(P0.05)。西曲瑞克组E浓度大幅度下降(P0.01)。卵巢AMH:与空白组对比,模型组卵巢局部的AMH浓度下降(P0.01),经治疗后左归丸组及中西结合组的AMH浓度恢复到空白组水平,其中中西结合组与模型组相比差异显著(P0.01)。卵巢FSHR:与空白组对比,模型组卵巢局部FSHR浓度下降(P0.05),经治疗后三个治疗组的FSHR浓度上升,其中中西结合组与模型组对比差异最明显(P0.01)。***法检测各组氧化应激相关因子显示:与空白组对比,模型组NOS浓度上升(P0.05),经治疗后左归丸组、中西结合组较模型组下降,差异有统计学意义(P0.05)。与空白组对比,模型组NO浓度上升(P0.01),三个治疗组的NO浓度较模型组下降,差异有统计学意义(P0.01)。与空白组对比,模型组ROS浓度显著上升(P0.01),三个治疗组的ROS浓度均有下降,其中中西结合组的浓度与空白组相仿,与模型组相比差异显著(P0.01)。与空白组对比,模型组