芪石肾舒胶囊对糖尿病肾病大鼠肠道菌群的干预作用及与炎症因子相关性研究

作     者：张瑞瑞 

作者单位：西南医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张琼

授予年度：2020年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：糖尿病肾病 肠道菌群 炎症因子 芪石肾舒胶囊 

摘      要：目的:通过观察中药复方芪石肾舒胶囊对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)模型大鼠肠道菌群的干预作用及与炎症因子IL-6、MCP-1、TGF-β1的相关性,初步探讨芪石肾舒胶囊治疗糖尿病肾病的作用及机制。方法:将50只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表分为空白对照组、模型组、芪石肾舒胶囊高剂量组(肾高组)、芪石肾舒胶囊低剂量组(肾低组)、缬沙坦胶囊组,每组10只。除对照组外,其余各组给予高脂高糖饲料喂养4周后,采用空腹腹腔注射链脲佐菌素(STZ),构建糖尿病肾病大鼠模型。造模成功后,对照组、模型组予以生理盐水(0.01ml/g.d),肾高组予以芪石肾舒胶囊高剂量(2.4g/kg.d),肾低组予以芪石肾舒胶囊低剂量(1.2g/kg.d),缬沙坦组予以缬沙坦(0.034g/kg.d),每日1次灌胃,共8周。观察大鼠一般情况,于治疗前、治疗后2周、4周、8周称体重、测血糖,治疗前及治疗后2周测尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR),治疗前、治疗后4周、8周检测24小时尿蛋白定量。治疗8周结束后收集大鼠粪便样本,利用16sDNA微生物测序对群落结构分布进行比较,处死老鼠后留取肾脏,利用HE染色观察肾脏组织学改变,采集血液标本检测肾功能,运用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测血清IL-6、MCP-1、TGF-β1的表达水平。由于病程进展中模型组死亡4只,故统计数据样本量为每组6个,共计30样本量。结果:1.大鼠的体重情况:治疗前,与对照组相比其余各组大鼠体重明显增加(p0.05)。治疗后,与对照组相比模型组、缬沙坦组在各时间点体重明显减轻(p0.05)。2.大鼠血糖水平情况:与对照组相比,各造模组各时间点血糖水平明显升高(p0.05)。3.大鼠24小时尿蛋白定量变化:治疗前与对照组相比,其余各组24小时尿蛋白定量差异不具有统计学意义(p0.05);治疗第4周、第8周与对照组相比,其余各组24小时尿蛋白定量水平均显著升高(p0.05)。4.大鼠ACR变化:与治疗前相比,治疗2周后各造模组ACR均明显增加(p0.05)。5.大鼠肾功能变化:治疗8周,与对照组相比,其余各组大鼠血肌酐、尿素氮水平显著上升(p缬沙坦组肾高组肾低组。7.大鼠肠道菌群情况:Alpha多样性(alpha diversity)反映的是单个样品内部的物种多样性,通过群落丰度指数与群落多样性指数来衡量,群落丰度指数包括Chao1,此指数值越大说明群落的丰富度越高;群落多样性指数包括Shannon与Simpson,此指数值越大,说明样品的物种多样性越高。与对照组相比,其余各组Chao1指数下降,但只有模型组差异具有统计学意义(p0.05);与模型组相比,各药物治疗组Chao1指数有所上升,但只有缬沙坦组差异具有统计学意义(p0.05)。门水平相对丰度占优势的有厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)。与对照组相比,模型组拟杆菌门丰度上调、螺旋菌门丰度下调较显著(p0.05),其他如厚壁菌门、变形菌门、放线菌门丰度下调无统计