糖尿病小鼠骨髓内皮祖细胞动员、培养后生物学特性的研究

作     者：潘满昌 

作者单位：昆明医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：汪虹

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：内皮祖细胞 糖尿病创面 联合动员 体外培养 细胞功能 

摘      要：[目的]研究动员骨髓内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)后,再脱离糖尿病高糖微环境培养,观察细胞生物学活性的变化及血管原性情况,为应用EPCs促进糖尿病创面愈合提供依据。[方法]选用5-8周龄C57雄鼠,10只db/db小鼠为实验组;10只db/+小鼠为对照组。采用AMD3100与CSF联合动员骨髓内皮祖细胞,方法如下;每只小鼠第1天注射AMD3100,后续连续注射5天G-CSF,在第10天心脏采血制备EPCs。采用流式细胞术检测EPCs表面特异性标志CD34+/CD133+/CD309+细胞的表达率,免疫细胞化学染色法及摄取Dil-acLDL和结合FITC-UEA-1双荧光染色对EPCs进行的鉴定;鉴定为EPCs细胞后,采用传代至第三代的EPCs细胞进行PCR定量实时聚合酶链反应和蛋白印迹法检测细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor,SDF-1)、趋化因子受体4(CXCR4)基因及蛋白表达情况。[结果]①CCK-8实验显示:相同时间点,db/+组增殖速率明显高于db/db组;不同时间点,随着时间推移增殖速率逐渐增加(p=0.000);②两组黏附(p0.05)功能无明显差异;而两组迁移(p0.05)和管腔形成(p0.05)等功能无明显差异;③db/db 组 VEGF、CXCR4、SDF-1 蛋白表达水平低于 db/+组(p=0.019;p=0.001;p=0.003);④db/db 组 VEGF、CXCR4、SDF-1 的 mRNA 表达水平低于 db/+组(p=0.029;p=0.009;p=0.009)。[结论]先采用AMD3100再联合G-CSF动员糖尿病骨髓内皮祖细胞的方法,能较多地从外周血中分离出较高纯度的EPCs,糖尿病状态下EPCs的增殖,迁移和成管等功能均受损,经体外培养内皮祖细胞的相关血管生成因子的表达水平虽有所改善,但仍低于正常EPCs的水平。