HPV16 E6/E7通过抑制PTEN磷酸化下调TXNIP的表达进而促进肺癌细胞中GLUT1的葡萄糖摄取能力

作     者：汤佳怡 

作者单位：中国医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：吴广平

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：人类乳头瘤病毒 磷酸酶和紧张素同系物 硫氧还蛋白互作蛋白 葡萄糖载体蛋白-1 葡萄糖摄取 肺癌 

摘      要：目的:人类乳头瘤病毒（Human Papilloma Virus,HPV）与肺癌的发生发展密切相关。我们前期研究表明,HPV16 E6和E7能够上调肺癌细胞中葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）的表达水平。然而,E6和E7是否能够促进GLUT1葡萄糖摄取能力及其调控机制目前尚不清楚。已有研究表明,硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）能够调控GLUT1的表达及其葡萄糖摄取能力。但尚无研究报道HPV16与TXNIP之间是否存在联系。在本篇研究中,我们的目的是探索HPV16对肺癌细胞中TXNIP和GLUT1的调控作用及其潜在作用机制。研究方法:1.本研究分别应用转染和干扰技术双向调控肺癌细胞H1299和A549细胞中E6和E7蛋白,通过Western blotting和qRT-PCR方法分别检测下游基因PTEN磷酸化水平、TXNIP、HIF-1α及GLUT1的蛋白和mRNA的表达变化。2.应用干扰技术分别敲除PTEN和TXNIP的表达,检测下游基因TXNIP、HIF-1α及GLUT1的蛋白和mRNA的表达变化。3.应用核浆分离技术检测敲除TXNIP后在细胞核内和细胞浆内的HIF-1α蛋白表达变化。4.应用葡萄糖摄取实验检测敲除TXNIP后GLUT1对葡萄糖摄取的变化。结果:1.过表达HPV16中的E6和E7后,PTEN磷酸化水平和TXNIP表达水平明显降低,而HIF-1α及GLUT1表达水平明显增高。2.敲除E6和E7后,PTEN磷酸化水平和TXNIP表达水平明显增高,而HIF-1α及GLUT1表达水平明显降低。3.敲除PTEN后,TXNIP表达水平明显降低,而HIF-1α及GLUT1表达水平明显增高。4.敲除TXNIP后,HIF-1α和GLUT1表达水平明显增高。5.敲除TXNIP后,细胞核内HIF-1α的表达明显增高,细胞浆内HIF-1α的表达明显降低。6.敲除TXNIP后,GLUT1蛋白表达水平明显增高,细胞对葡萄糖摄取的能力增强。结论:***16 E6和E7通过下调PTEN磷酸化水平抑制TXNIP的表达,导致HIF-1α在细胞核内蓄积,进而上调GLUT1的表达水平,并促进肺癌细胞中GLUT1对葡萄糖的摄取能力。2.我们的研究证明了TXNIP在HPV相关性肺癌的发生发展中具有重要作用,也为HPV相关性肺癌的治疗提供潜在靶点。