ER基因多态性与多发性硬化和视神经脊髓炎的相关性研究
作者单位：广东药科大学
学位级别：硕士
导师姓名：洪铭范
授予年度：2020年
学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学]
摘 要：研究背景多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种因受免疫系统攻击而发生中枢神经系统白质炎性脱髓鞘病变的自身免疫性疾病,起病年龄多在20～40岁,其中女性MS大约占65%～70%,常累及的病变部位为脑室周围白质、脑干、小脑、视神经及脊髓,主要临床表现为反复发作的肢体无力、感觉异常、视力障碍等。视神经脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)是一种主要影响视神经和脊髓并以急性或亚急性脱髓鞘病变为病理特征的自身免疫性疾病,青壮年多见,女性明显高发,女性患病率为男性的5～10倍,常有劳累、感冒、腹泻等诱因和伴有一些其他自身免疫性疾病的表现,可有视力下降、肢体无力、眼痛、恶心呕吐、大小便障碍等临床表现。根据同时或相继发生的视神经炎、脊髓炎,脑和脊髓MRI以及NMO-Ig G血清学检测结果可作出临床诊断。MS与NMO为中枢神经系统脱髓鞘病中最常见的两种类型,NMO以往曾被当做是MS的一种亚型,两者相似之处甚多,脱髓鞘是其病理过程中共同具有的特征性表现。二者发病原因尚不完全清楚,目前大多数观点认为,MS和NMO可能是由基因易感性、环境因素和感染因素共同作用的结果。由于缺乏针对性的特效治疗药物,常导致患者不同程度的残疾,严重影响患者的生活质量。MS和NMO均好发于女性,存在明显的性别分布差异。大量的临床观察及实验均表明,妊娠可显著影响MS和NMO的发生发展、疾病的严重程度及其复发,妊娠期间患者症状可明显减轻,缓解期患者很少复发。虽然以上现象的确切机制尚不太清楚,但推测MS和NMO发病可能与雌激素有关。人体内雌激素通过与其特异性受体相结合而发挥其重要生理作用,雌激素受体(estrogen receptor,ER)可分为ERα和ERβ两种,ER的表达和功能影响着雌激素的生物学效应。我们前期研究发现具有拟雌激素效应的淫羊藿苷(icariin,ICA)可通过ERβ发挥其对自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的治疗作用,亦有许多研究表明雌激素与MS和NMO的发病和治疗密切相关,且可能与ER基因多态性也存在相关。PvuⅡ和XbaⅠ是ERα基因多态性常见的位点,RsaⅠ和AluⅠ是ERβ基因多态性常见的位点。ERα基因使用PvuⅡ内切酶、XbaⅠ内切酶进行酶切反应分别可区分出PP、Pp、pp和XX、Xx、xx 3种基因型;ERβ基因使用RsaⅠ内切酶、AluⅠ内切酶进行酶切反应分别可区分出RR、Rr、rr和AA、Aa、aa 3种基因型。然而,以上常见的ER基因多态性与MS和NMO之间的关系尚不太清楚。因此,近年来ER基因多态性与MS和NMO疾病相关性的研究成为了热点方向。本研究拟纳入确诊的MS和NMO患者作为病例组,采集外周静脉血,应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和限制性内切酶片段长度多态性法(restriction fragment length polymorphism,RFLP)来检测单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点的基因型,探讨ER基因多态性与MS和NMO的关系。研究目的研究MS和NMO患者ER基因多态性分布及不同类型多态性与两者的关系:通过聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性法(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)对ERα基因的PvuⅡ和XbaⅠ两个酶切识别位点及ERβ基因的RsaⅠ和AluⅠ两个酶切识别位点进行分析,研究ERα、ERβ基因多态性在MS和NMO患者与健康志愿者中的分布情况,探讨它们与MS和NMO的关系,为MS和NMO发病的易感性及疗效的影响因素研究和综合治疗方案的拟定提供客观生物学实验依据。研究方法第一部分多发性硬化和视神经脊髓炎患者选择及临床资料对所有来院就诊的MS和NMO患者进行采血,采集外周静脉血3ml,用EDTA抗凝,样本编号,记录备用,同时记录患者临床资料。所有MS患者均符合《2017修订版Mc Donald多发性硬化诊断标准》;所有NMO患者均符合《中国视神经脊髓炎谱系疾病诊断与治疗指南》。合并其他自身免疫性疾病、肿瘤、颅脑感染性疾病的患者排除纳入。另选择同期年龄、性别相当的健康志愿者作为对照组,采外周血3ml备用。MS和NMO病例组共46例,男5例,女41例,年龄17～67岁,平均年龄(43.63±13.76)岁;病程5天～12年,平均(2.61±3.98)年。健康对照组共58例,男8例,女50例,年龄17～72岁,平均年龄(46.20±14.44)岁。第二部分应用PCR-RFLP
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