人参多糖对乙醇诱导的行为敏化和戒断反应的保护作用及相关机制研究

作     者：卢梦 

作者单位：长春中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：郭焱

授予年度：2020年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：人参多糖 行为敏化 乙醇戒断 前额叶皮层 ERK ACTH 皮质酮 

摘      要：目前,大多数乙醇依赖的机制研究主要集中在中脑边缘多巴胺系统。近年来,对ERK/c-fos信号通路和下丘脑-垂体-肾上腺轴(hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA)参与乙醇成瘾、戒断和复饮的研究不断增加。人参多糖(ginseng polysaccharides,GSP)为人参主要活性成分之一,已有报道证实GSP可改善老年痴呆模型大鼠学习记忆能力,并可减少小鼠攻击行为及在强迫游泳中的静止时间,但在抗乙醇成瘾方面并未有报道。本研究首次采用双瓶选择饮酒模式建立了自由摄取乙醇的行为敏化模型用于考察GSP对乙醇成瘾的保护作用,探究GSP对乙醇诱导的行为敏化和依赖戒断小鼠行为学及前额叶皮层ERK/c-fos信号通路和HPA轴的影响。目的:探究GSP对长期自由摄入乙醇诱导的行为敏化及依赖戒断行为变化的影响,并通过检测前额叶皮层ERK、c-fos蛋白和mRNA的表达及血浆促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)和皮质酮水平的影响,为乙醇依赖治疗提供新思路。方法:1人参多糖对乙醇诱导的行为敏化小鼠的保护及其对前额叶皮层ERK/c-fos通路的影响。昆明小鼠120只随机分为两部分,第一部分随机分为空白组、GSP低剂量组(100mg/kg)、GSP中剂量组(200 mg/kg)和GSP高剂量组(400 mg/kg),每组10只。GSP三个剂量组每天灌胃给予人参多糖溶液,空白组给予同等体积蒸馏水,连续给药1周,并在给药第1天、3天、7天测试各组小鼠自主活动。第二部分随机分为五组,空白组、模型组、GSP低、中和高(100、200和400 mg/kg)。除空白组外,其余各组可自由摄取水或乙醇,乙醇浓度随时间逐渐递增(3%2%,每4天递增3%),经过4天转换期后给予初始剂量3%乙醇激发,以此建立主动摄取乙醇的行为敏化模型。实验周期内每天测量各组乙醇消耗量和自主活动;转换期进行开场实验;表达期测定行为敏化的表达。酶联免疫吸附法(ELISA)检测前额叶皮层MDA含量及SOD、CAT和GSH-Px活力。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测前额叶皮层ERK、p-ERK、c-fos、NOX4、Beclin1、BAX和BCL2蛋白表达。实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测前额叶皮层p-ERK、C-FOS的mRNA表达。2人参多糖对乙醇依赖小鼠戒断行为及血浆ACTH和皮质酮的影响将昆明小鼠100只,随机分为五组,空白组腹腔注射生理盐水,模型组和GSP三个剂量组(100,200和400 mg/kg)腹腔注射2.5 g/kg乙醇(20%v/v),连续15 d,并于最后一次给予乙醇后24 h进行明暗箱实验、高架十字迷宫实验和乙醇戒断症状评分。ELISA检测血浆中ACTH和皮质酮含量。结果:1在双瓶选择饮酒模式融合行为敏化的模型中,GSP(100、200和400 mg/kg)可显著降低形成期内9%2%(第130天)乙醇引起的自主活动增加,并显著抑制初始剂量3%酒精激发(第25天)诱导的自主活动增加和乙醇摄入。此外,GSP中、高剂量能够显著减少开场实验中行为敏化组爬格数和站立次数。另外,抗氧化应激实验结果表明GSP可显著抑制乙醇诱导的前额叶皮层MDA水平的增加,并提高SOD、CAT和GSH-Px的活性。Western blot实验结果表明GSP能够下调前额叶皮层p-ERK,c-fos和NOX4蛋白的过度表达,而GSP对前额叶皮层Beclin1、BCL2和BAX蛋白表达均无显著影响。此外,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)实验结果表明GSP能够下调前额叶皮层p-ERK和c-fos的mRNA的过度表达。另外,单独给予GSP(100、200和400 mg/kg)对小鼠自主活动无影响。2在乙醇依赖戒断模型中,GSP中、高剂量显著提高乙醇依赖戒断小鼠在明暗室中穿梭次数和在明室内停留时间,高架十字迷宫实验结果表明GSP中、高剂量显著提高乙醇依赖戒断模型小鼠进入开臂次数比和在开臂停留时间比。此外,GSP中、高剂量组较模型组均显著降低了小鼠戒断症状评分。ELISA结果显示GSP显著降低了戒断组小鼠血浆皮质酮含量并增加ACTH含量。结论:GSP对乙醇诱导的小鼠行为敏化和乙醇摄取有保护作用,并能够降低行为敏化小鼠前额叶皮层MDA水平,增加抗氧化因子SOD、CAT、GSH-Px活性,抑制ERK、c-fos蛋白及mRNA的过度表达。此外,GSP对长期摄入乙醇戒断引起的焦虑相关行为也有改善作用,能够降低戒断组小鼠血浆皮质酮含量并增加ACTH含量。