肿瘤相关巨噬细胞分泌的CXCL8通过HOXB13抑制雌激素受体alpha促进子宫内膜癌进展

作     者：仝欢 

作者单位：上海交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：万小平

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肿瘤相关巨噬细胞(TAMs) 雌激素受体alpha(ERα) CXCL8 子宫内膜癌 HOXB13 侵袭 

摘      要：目的:分析子宫内膜癌组织中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)和雌激素受体alpha(ERα)的表达情况及两者相关性。并探索肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)抑制子宫内膜癌细胞株中ERα表达的调控作用及其具体机制以及与预后之间的关系。内容:检测80例正常子宫内膜组织和80例子宫内膜癌组织中CD163和ERα蛋白的表达。建立肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)和子宫内膜癌细胞系的共培养模型。分别使用HOXB13 shRNA及阴性对照(shNC)对HEC-1A和Ishikawa细胞进行稳定转染,检测HOXB13和ERαmRNA和蛋白的表达。共培养后,检测巨噬细胞表面标记CD68和CD163,并验证共培养后子宫内膜癌细胞迁移、侵袭能力的变化。筛选肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)条件培养基中浓度变化显著的因子,检测HOXB13与ERα启动子的结合位点。收集子宫内膜癌患者肿瘤标本,检测子宫内膜癌组织连续切片中CXCL8、HOXB13、ERα和EMT相关蛋白水平。搜索TGCA子宫内膜癌数据库,分析CXCL8、HOXB13与ESR1的相关性,并绘制相应生存曲线。方法:应用免疫组织化学方法检测组织中CD163、CXCL8、HOXB13和ERα蛋白的表达。用共培养小室建立肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)和子宫内膜癌细胞系的共培养模型。分别应用qRT-PCR技术和Western blot技术检测mRNA和蛋白的表达。应用细胞免疫荧光技术检测巨噬细胞表面标记CD68和CD163,用Transwell小室进行侵袭实验。应用蛋白质芯片技术筛选肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)条件培养基中浓度变化显著的因子。应用ChIP-qPCR和琼脂糖凝胶电泳技术检测HOXB13与ERα启动子的结合位点。结果:TAMs的表达与肿瘤级别和肌层浸润情况呈正相关(p0.001),而ERα的表达与肿瘤级别和肌层浸润情况呈负相关(p0.001)。TAMs分泌的CXCL8上调了子宫内膜癌细胞中的HOXB13,且HOXB13可以与细胞核内ESR1基因的启动子结合,抑制ESR1基因转录,降低ERα蛋白表达,促进肿瘤的侵袭。结论:肿瘤相关巨噬细胞分泌的CXCL8通过上调HOXB13抑制雌激素受体alpha并促进了子宫内膜癌进展。