不同方法炮制的人参对小鼠免疫功能的影响

作     者：白玉洁 

作者单位：吉林农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王英平

授予年度：2019年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：大力参 生晒参 红参 环磷酰胺 免疫功能 

摘      要：本文采用环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)作为免疫抑制剂,建立小鼠免疫抑制模型。首先探究不同方法炮制的人参(大力参、生晒参、红参)对模型小鼠免疫功能的影响,并检测大力参、生晒参、红参主要活性成分;进一步研究了红参不同提取组分对模型小鼠免疫功能的影响,并对其活性成分进行检测分析。为人参在食品、药品等方面的开发利用提供了实验依据。1.小鼠免疫功能低下模型的建立通过腹腔注射小鼠不同剂量的CTX,观察CTX对正常BALB/c小鼠器官指数、白细胞数、脾淋巴细胞增殖能力、迟发型变态反应、碳廓清能力、NK细胞活性及细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6含量等各项免疫指标的影响,为后续试验选择合适的免疫抑制动物模型。研究结果显示,与空白对照组相比较,不同剂量的CTX在不同给药时间下,在一定程度上可以抑制小鼠免疫功能;低剂量CTX对小鼠免疫功能抑制不明显,且可能起到促进作用;一次性高剂量注射CTX对小鼠免疫功能抑制不明显;给药时间相同时,CTX以剂量依赖性方式抑制小鼠免疫功能。总体试验结果表明,正常小鼠腹腔注射CTX 80mg/kg,连续给药5 d后,小鼠各项免疫功能指标均降低。因此,选用CTX 80 mg/kg连续给药5 d作为免疫抑制动物模型。2.大力参、生晒参、红参对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响采用上述已建立的免疫功能低下小鼠模型,通过给予模型小鼠不同炮制方法的人参(大力参、生晒参、红参),灌胃给药30 d,探究大力参、生晒参、红参对模型小鼠免疫功能的调节作用,并使用超高压液相法(UPLC)、液-质-质连用仪检测大力参、生晒参和红参中人参皂苷成分,使用萘酚-浓硫酸法检测其可溶性多糖成分。研究结果表明,大力参、生晒参和红参均可不同程度提高免疫功能低下小鼠胸腺指数、脾指数和白细胞数,提高脾淋巴细胞增殖能力、碳廓清能力、迟发型变态反应、提高NK细胞活性及血清中细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6水平(P0.05或P0.01);在大力参和红参加工过程中,由于高温,三醇型皂苷含量减少,二醇型皂苷含量增加,且红参中含有生晒参和大力参中不含有的人参皂苷Rh;红参中可溶性多糖含量最高,可达18.247%,大力参(13.121%),生晒参(12.766%)。总体试验结果表明,大力参、生晒参和红参均可以改善CTX所致免疫功能低下小鼠的免疫功能,红参作用最强,大力参次之,生晒参作用较弱。尤其在细胞免疫方面,红参、大力参效果明显优于生晒参。3.红参不同提取组分对免疫功能低下小鼠免疫功能的调节作用通过给予模型小鼠不同红参提取组分,灌胃给药30 d,探究其对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响,并使用UP LC检测红参不同提取组分中人参皂苷成分,使用萘酚-浓硫酸法检测其可溶性多糖成分。结果显示,红参不同提取组分均可不同程度提高免疫功能低下小鼠胸腺指数、脾指数、白细胞数、脾淋巴细胞增殖能力、迟发型变态反应、碳廓清能力、NK细胞活性及细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6含量各项指标(P0.05或P0.01);红参水提物中皂苷含量与多糖成分含量较高,在醇提物中未检测到多糖成分。总体试验结果表明,红参醇提物与水提物对CTX所致免疫功能低下小鼠的免疫功能有较好的提升作用,其中红参水提物免疫增强效果优于醇提物。