可溶性环氧化物水解酶抑制剂在SD大鼠牙周炎样模型中的治疗作用研究

作     者：张文园 

作者单位：大连医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王福

授予年度：2017年

学科分类：1003[医学-口腔医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100302[医学-口腔临床医学] 10[医学] 

主      题：可溶性环氧化物水解酶抑制剂 牙周炎 组织再生 SD大鼠 

摘      要：研究目的:牙周炎是一种高发的口腔疾病,其发病机制目前尚不十分清楚,研究者一直致力于寻求更好的治疗方法,改善微环境激发内源性牙周组织的重建与再生成为当前研究热点。环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs)通过细胞色素P450催化代谢花生四烯酸产生,在改善微环境,抗炎和抑制破骨等方面具有重要作用。但EETs在体内易降解,影响其临床应用。本课题组通过体内外实验给予可溶性环氧化物水解酶抑制剂(soluble epoxide hydrolase inhibitor,sEHi)抑制EETs的分解,提高内源性EETs水平来研究sEHi治疗牙周炎和促进牙周组织再生的作用,为临床牙周病的治疗探索新的途径。研究方法:体外实验,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色及Q-PCR检测sEHi处理下小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7向破骨细胞分化能力及破骨细胞相关标记基因TRAP,MMP-9,CK,c-Fos的表达,探究sEHi(TPPU)对破骨细胞形成的影响;通过Q-PCR及管形成实验检测TPPU对LPS刺激下的人脐静脉内皮细胞系(HUVEC)相关炎性因子TNF-α,IL-1β,IL-6的表达及管形成的作用,探究sEHi(TPPU)对细胞迁移和炎症影响。体内实验,选用8周龄健康雄性SD大鼠40只,4.0丝线结扎双侧下颌第一磨牙,高糖水喂养4周,建立牙周炎样模型。分别于结扎的第1周,第2周,第3周,第4周进行口腔大体观察和牙周相关指数检测,4周后去除结扎线,锥形束CT(cone beam CT,CBCT)放射检测牙槽骨吸收情况。对建模成功的SD大鼠,左侧第一磨牙牙周局部注射TPPU做为药物处理侧,右侧第一磨牙牙周局部注射PBS作为对照侧。观察1个月后进行CBCT放射检查分析。各组SD大鼠固定后,收集下颌骨脱钙包埋进行石蜡切片、HE染色、CD31免疫组织化学染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察牙周组织炎性细胞浸润、血管新生、破骨细胞数量及牙槽骨的再生情况。研究结果:体外实验:TRAP染色和Q-PCR检测结果显示TPPU可以抑制RAW264.7向破骨细胞分化及破骨细胞相关基因的表达,同时可以抑制LPS刺激下HUVEC相关炎性因子的产生。TPPU对HUVEC管形成具有促进作用(P0.05)。体内实验:丝线结扎+高糖水喂养四周后能够成功建立SD大鼠牙周炎样模型,表现为牙周红肿,探诊易出血,部分模型牙龈退缩,放射检查牙槽骨有明显吸收;组织化学染色显示结扎组四周后牙周软组织炎性细胞浸润明显多于未结扎组,牙槽骨可见明显吸收。TPPU药物处理四周后,牙槽骨高度和CD31阳性新生血管数高于对照组(P0.05),牙周软组织炎性细胞浸润和牙槽骨吸收水平明显低于对照组(P0.05)。结论:TPPU可以抑制RAW264.7破骨细胞的形成及HUVEC炎性因子的产生,促进血管形成。TPPU能够促进SD大鼠牙周炎样模型的牙槽骨再生与牙周软组织的恢复,sEH有望作为治疗靶点用于牙周炎的治疗。