桢楠组培技术研究

作     者：余云云 

作者单位：安徽农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘桂华

授予年度：2019年

学科分类：0907[农学-林学] 08[工学] 0829[工学-林业工程] 09[农学] 

主      题：桢楠 组织培养 初代培养 继代增殖 生根诱导 

摘      要：桢楠(Phoebezhennan),樟科楠属,常绿高大乔木,杆形劲直,木质坚硬,生长寿命长,为我国独有的珍贵保护树种,也是理想的庭院树种和园林景观绿化树种,且木材文理清晰美观,抗腐蚀性好,是极佳的木材树种,现在还有人发现桢楠植物精油有抑制肿瘤细胞增长的功效。由于桢楠自然分布数量少,种子采集资源稀缺,抗逆性差,育苗周期长等因素的影响,导致桢楠这一树种资源日益消减,出现供需严重不足的现象,迫切需要利用组织培养的方式来快速繁育桢楠。目前关于樟科各树种的栽培繁育技术虽有一定的成果,但是关于桢楠组织培养的研究甚少,目前还没有发现成功的案例,只有个别学者诱导出桢楠的愈伤组织,但是没有进一步深入研究。本研究从无菌体系的建立,初代培养,继代增殖,生根诱导以及愈伤诱导优化五个方面对桢楠组织培养技术进行了试验探讨,筛选出适宜桢楠的组培条件,构建较为完整的桢楠组培体系,对保护珍稀树种的种质资源,增加桢楠繁育方式,扩大园林景观树种选择,解决桢楠资源缺少现状,广泛应用等具有重要的意义。本文关于桢楠组培体系研究的主要试验结果如下:(1)桢楠带芽茎段的最佳消毒措施是以0.1%Hgc12溶液处理4.5min,污染率控制在40%左右,且萌发率最高,达到了 68.42%。在此基础上增加处理时间,以0.1%Hgc12施以5.5min-15min时的污染率没有区别,但是芽萌发率却降到了 15.39%。以0.1%升汞浸泡外植体3.0min-3.5min,或者用不同浓度的Naclo溶液浸泡15min时,污染率突增,污染率达到了 90%左右。(2)桢楠启动培养时,最宜芽萌发诱导培养基为1/2 MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/LZT+0.3 mg/L IBA,且外植体采用幼嫩新梢带芽茎段最为适宜,取材时间控制在四月份时,启动培养的效果最好,污染率只有6.72%,成活率高达95.96%,芽萌发率达到71.19%。(3)诱导桢楠丛生芽增殖培养时,最佳的培养条件是以启动培养中外植体年龄为2-3月幼苗所萌发的新芽为材料,以1/2 MS为基础培养基再添加浓度分别为0.5 mg/L和4.0 mg/L的TDZ和GA3时,新生芽增殖系数达到2.92且芽增殖现象出现早,红绿色新生芽长势好,生长健壮。(4)桢楠根系诱导时,当NAA和IBA都在0.01 mg/L-1.0 mg/L的不同浓度水平下诱导生根时,仅发现愈伤组织并且未观察到根系。当处理为1/2MS+0.01 mg/L NAA+0.2 g/L活性炭时能成功长出约2cm的白色粗健强壮根系,但是生根率不高,只有 8.33%。(5)进行桢楠愈伤诱导时,以幼叶作为外植体材料,基础培养基选用MS再添加0.5 mg/L6-BA+5.0 mg/LNAA,暗培养一周左右再进行光培养,愈伤诱导率最高达96.87%,几乎每个外植体上都诱导出大量密集点状愈伤,质地疏软,呈白色偏绿色。