乳腺癌中RBM38调节PTEN的表达机制的研究

作     者：周旭婕 

作者单位：南京医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：丁强

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：乳腺癌 RBM38 PTEN mRNA稳定性 生长抑制 

摘      要：目的:研究RNA结合蛋白RBM38在乳腺癌中对PTEN表达的影响,进一步研究RBM38调节PTEN表达的机制。探讨PTEN表达对RBM38生物学效应的影响。材料和方法:用RNA免疫共沉淀测序检测RBM38的相关基因。用免疫组化、慢病毒转染法,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot、Elisa等方法检测RBM38与PTEN的相关性。运用RNA免疫共沉淀(RIP)实验检测RBM3 8和PTEN mRNA的结合情况,双荧光素酶报告实验检测RBM38结合PTEN mRNA的结合位点。使用放线菌素D分别处理RBM38慢病毒稳转细胞株,观察RBM38对PTEN的mRNA半衰期的影响。小干扰、抑制剂和平板克隆形成实验检测RBM38过表达细胞株在PTEN干扰后的细胞长期生长情况。结果:RNA免疫共沉淀测序发现RBM38和PTEN有相关性;免疫组化、qRT-PCR、Western blot和Elisa发现PTEN的表达和活性与RBM38呈正相关,差别有统计学意义(p0.05)。双荧光素酶报告基因实验、RNA免疫共沉淀实验和REMSA实验表明RBM38能与PTEN的mRNA3’端非编码区AU/U富含区域结合。在mRNA稳定实验中,RBM38过表达后,PTEN的mRNA稳定性增强;RBM38干扰后,PTEN的mRNA稳定性随之降低。小干扰、抑制剂和平板克隆形成实验发现PTEN干扰后的RBM38过表达导致的细胞生长抑制率降低。结论:在乳腺癌组织中RBM38与PTEN的表达存在正相关。过表达RBM38后PTEN的表达和活性增加,敲低RBM38后PTEN的表达和活性降低。RBM38能与PTEN的mRNA的3’端非编码区AU/U富含区域直接结合并增强其稳定性。RBM38通过转录后调控PTEN的mRNA稳定性从而影响PTEN的表达,PTEN的表达也可以影响RBM38调控的细胞增殖。