柿叶总黄酮的吸收代谢机制及其磷脂复合物的研究

作     者：张胜海 

作者单位：北京中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王英姿

授予年度：2014年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：化学成分 磷脂复合物 毛细管电泳 柿叶总黄酮 吸收代谢 

摘      要：目的:本论文以柿叶黄酮为研究对象,以阐明柿叶中主要黄酮类化合物的主要组成及吸收代谢过程为主要目的,并结合柿叶黄酮的特性制备了磷脂复合物。方法:(1)应用色谱技术对柿叶中的黄酮类化合物进行了分离纯化,通过理化方法和波谱数据对得到的化合物进行结构鉴定。(2)建立高效毛细管电泳——激光诱导荧光(HPCE-LIF)检测柿叶中三种主要苷元(异鼠李素、山奈酚、槲皮素)的方法,并进行柿叶黄酮大鼠灌胃后的药代动力学研究。(3)采用溶剂法制备柿叶总黄酮磷脂复合物,以柿叶总黄酮中黄酮类化合物与磷脂的复合率为评价指标,结合单因素考察和正交试验,确定其最佳制备工艺条件。(4)采用离体培养方法研究肠内菌对柿叶黄酮及其磷脂复合物的代谢过程,并通过HPLC/LTQ-MS研究柿叶黄酮在体内的代谢过程。结果:(1)从柿叶的乙酸乙酯部位分离并鉴定了 6个黄酮类化合物,分别为:1)染料木素;2)异鼠李素,3)槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷,4)槲皮素,5)槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,6)芦丁,化合物1～3为首次从该植物中分得。(2)建立了 HPCE-LIF检测异鼠李素、山奈酚、槲皮素的方法,三个黄酮类成分呈良好线性关系,精密度和准确性,检出限分别为0.05、0.03、0.06mg/L,优于紫外检测器。在血浆样品中的提取回收率在82.5～93.1%之间。药代动力学曲线显示异鼠李素、槲皮素呈现三峰现象。(3)确定了磷脂复合物的最佳制备工艺:无水乙醇作为反应溶剂,药辅比1:2,反应物质量浓度30 mg/mL,在30℃下反应1 h。在此条件下复合率为96.95%。反应溶剂、药辅比是磷脂复合物制备过程中的主要影响因素。(4)肠内菌离体培养代谢柿叶黄酮迅速,黄酮苷类在2h后几乎代谢完全,代谢4h后检测不到黄酮苷元。肠内菌代谢柿叶黄酮的速率可能与肠内菌的浓度有关。.柿叶黄酮形成磷脂复合物后被肠内菌代谢的速率较柿叶黄酮变慢。在柿叶黄酮灌胃大鼠后,在其尿液中检测到8种黄酮苷及苷元,在血液中检测到3中黄酮苷,未发现黄酮苷元的存在。结论:本论文以柿叶总黄酮为研究对象,通过对柿叶的乙酸乙酯部位进行了化学分离及结构鉴定,明确柿叶中黄酮类化合物的主要组成成分;本文首次建立了高效毛细管-激光诱导荧光检测黄酮类化合物的方法,并明确柿叶黄酮的吸收代谢机制;根据黄酮类化合物具有多酚羟基的特性,制备了柿叶黄酮磷脂复合物,并进行了理化性质研究;通过对柿叶黄酮及其磷脂复合物的肠内菌代谢特性进行研究,结果表明柿叶黄酮形成磷脂复合物后,肠内菌对其代谢速率减慢。