P2X7受体在PCPA所致失眠大鼠大脑皮质蛋白激酶活动变化中的作用及酸枣仁汤的干预作用

作     者：左文彪 

作者单位：贵阳中医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：王慧

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：PCPA P2X7 受体 P38MARK CaMKⅡ PKC 

摘      要：目的:通过建立PCPA大鼠失眠模型,观察PCPA致失眠后大鼠大脑皮质信号分子P38MAPK、PKC、CaMKII mRNA和蛋白表达变化情况。脑室注射P2X受体拮抗剂以及P2X7受体拮抗剂和激动剂,观察大鼠P2X7受体在PCPA所致大脑皮质蛋白激酶活动变化中的作用。用SZRD进行干预,观察SZRD对失眠大鼠大脑皮质信号分子P38MAPK、PKC、CaMKII mRNA和蛋白表达的影响。方法:1.将健康清洁级SD大鼠随机分为正常组,手术对照组,PCPA组,PCPA+OXATP 组,PCPA+A438079 组和 PCPA+BzATP 组共 6 组,每组 6 只。除正常组外,其余每组动物进行脑室插管,脑室插管后动物需恢复7d后观察是否有无异常状况。然后采用连续3d腹腔注射PCPA的方法制备大鼠失眠模型。每只大鼠腹腔注射完毕后立即进行脑室注射,PCPA+OXATP组脑室注射P2X受体拮抗剂OXATP,PCPA+A438079组脑室注射P2X7受体拮抗剂A438079,PCPA+BzATP组脑室注射P2X7受体激动剂BzATP。采用RT-PCR以及Western blot法检测皮质组织P38MARK、PKC、CaMKII mRNA以及蛋白的表达。2.将健康清洁级SD大鼠随机分为正常组,手术对照组,PCPA组,PCPA+SZRD 组,PCPA+OXATP+SZRD 组,PCPA+A438079+SZRD 组,PCPA+BzATP+SZRD组,手术对照+SZRD组共8组,每组6只。除正常组外,其余每组动物均需要进行脑室插管,脑室插管后动物需要恢复7d。然后连续3d腹腔注射PCPA的方法制备大鼠失眠模型。正常对照组、手术对照组、手术对照+SZRD组按照同样的方法腹腔注射等体积的生理盐水。腹腔注射完毕后立即进行脑室注射,除PCPA+SZRD组与手术对照+SZRD组脑室注射生理盐水外,其余每组脑室注射药物及方法同实验一。区别在于在实验一的基础上进行SZRD(15 g·kg-1)灌胃治疗,连续7天。正常组,手术对照组,PCPA组按同体积生理盐水灌胃。灌胃完毕后,利用RT-PCR以Western blot及法测定各组大鼠大脑皮质P2X7受体后信号分子P38MAPK、PKC、CaMKII mRNA和蛋白的表达。结果:1.与手术对照组比较,PCPA组大鼠大脑皮质组织P38MARK mRNA及蛋白表达显著上调(P0.05),PKC、CaMKⅡ蛋白表达上调(P0.05),PKC、CaMKⅡ 蛋白表达上调(P0.05);手术对照+SZRD组与手术对照组比较P38MAPK、PKC、CaMKⅡ mRNA及蛋白表达无显著性差异(P0.05)。结论:***能导致失眠大鼠大脑皮质内P38MAPK mRNA及蛋白表达明显上调,PKC、CaMKⅡ mRNA及蛋白表达下调。2.P2X7受体介导了 PCPA所致的P38MAPK、PKC、CaMKⅡmRNA和蛋白的表达变化。***改善失