PR3在脓毒症早期炎症反应中的作用及其调控机制研究

作     者：陈杨 

作者单位：上海交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：瞿洪平

授予年度：2018年

学科分类：100218[医学-急诊医学] 1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

主      题：脓毒症 炎症反应 PR3 JMJD3 促炎因子 

摘      要：背景:脓毒症早期大量促炎因子活化引起的过度炎症反应是导致脓毒症早期患者死亡的主要原因。研究发现同时阻断IL-1β和IL-18能显著改善脓毒症小鼠预后,因此寻找靶点早期阻断多种促炎因子活化具有重要意义。中性粒细胞膜蛋白酶3(m PR3)对多种促炎因子具有正向调节作用。基因表达的表观遗传调控是调节脓毒症患者髓系细胞功能的重要机制。但中性粒细胞m PR3在脓毒症中的调控机制未有研究报道。本研究旨在阐明脓毒症早期中性粒细胞m PR3的表达及其与炎症因子和疾病严重程度的关系,探讨m PR3的调控机制。方法:纳入符合脓毒症诊断的患者,确诊24小时内采集外周血并以健康志愿者为对照组。离心获得中性粒细胞和血浆,检测中性粒细胞m PR3和组蛋白去甲基化酶3(JMJD3)表达,检测血浆IL-1β、TNF-α水平。脂多糖(LPS)刺激正常人中性粒细胞,实验分为4组:对照组,LPS刺激组,LPS+GSK-J4组(GSK-J4为JMJD3的抑制剂)及GSK-J4组。以上四组中性粒细胞分别与单核细胞共培养,检测单独中性粒细胞培养组m PR3的RNA和蛋白水平,检测中性粒细胞第27位赖氨酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3)表达水平。检测各单独培养中性粒细胞组和共培养细胞组上清IL-1β水平。结果:与健康志愿者相比,脓毒症患者中性粒细胞m PR3和JMJD3均显著升高;与m PR3低表达组相比,m PR3高表达组的脓毒症患者血浆TNF-α和IL-1β水平显著升高,m PR3高表达组的脓毒症患者APACHEII评分显著升高。体外实验表明,在单独中性粒细胞培养条件下:与空白对照组相比,LPS刺激组m PR3和IL-1β均显著升高。与LPS组相比,LPS+GSK-J4组m PR3和IL-1β均显著下降。LPS刺激中性粒细胞后,H3K27me3表达明显下降;与LPS组相比,LPS+GSK-J4干预组H3K27me3水平显著升高。在共培养细胞条件下:LPS刺激细胞培养上清中IL-1β的水平显著高于空白对照组;GSK-J4干预的共培养细胞上清中IL-1β的水平显著低于未加干预的LPS刺激共培养细胞体系;LPS刺激共培养细胞上清中IL-1β的水平显著高于各相应单独培养细胞组。结论:脓毒症早期患者外周血中性粒细胞m PR3和JMJD3的表达升高,m PR3的表达升高与血浆炎症因子增高相关,m PR3可能反映疾病严重程度。JMJD3调控中性粒细胞m PR3的表达,进而可能调控IL-1β水平。JMJD3可能通过修饰H3K27me3调节中性粒细胞m PR3的表达。