RAP1A在结直肠癌中的临床意义和促癌分子机制研究

作     者：刘立果 

作者单位：上海交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：金志明

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：RAP1A 结直肠癌 靶向治疗 波形蛋白 预后 

摘      要：目的探讨基因RAP1A（Ras-related protein1,RAP1A）在结直肠癌中的表达及临床意义并探讨其在结直肠癌进展中的机制。材料和方法1.选取结直肠癌患者的组织标本,检测RAP1A的表达并分析其临床意义。2.检测不同结直肠癌细胞株中RAP1A的表达并通过慢病毒转染构建沉默RAP1A的稳转株,通过MTT、克隆形成、流式细胞术、Transwell侵袭与转移实验检测敲减RAP1A后肿瘤细胞的生物学功能变化情况。动物实验体内进行探究RAP1A的生物学作用。3.通过转录组基因芯片进行分析,探究结直肠癌细胞中RAP1A所调控的下游分子及涉及的信号通路并对下游通路蛋白进行验证,检测肿瘤细胞中EMT标记物的表达情况。4.对下游调节基因进行过表达实验,通过MTT实验,克隆形成试验,流式细胞术检验靶基因的细胞生物学功能变化。5.在II期结直肠癌标本中检测中RAP1A下游分子波形蛋白的表达水平并分析临床意义。结果1.结直肠癌组织中RAP1A表达与肿瘤浸润显著相关（P0.05）,其表达水平是影响结直肠癌患者的独立的预后因素。2.下调RAP1A的表达后,细胞增殖、抗凋亡、侵袭能力、迁移能力、克隆形成能力均被抑制（P0.05）。动物实验也表明下调RAP1A可以使HT29和SW620细胞株在裸鼠皮下成瘤能力明显下降（P0.05）。3.基因芯片分析表明PTEN信号通路参与了RAP1A的调控,进一步实验发现FOXO3显著上调（P0.05）,进而确定FOXO3可能为RAP1A调控下游的靶点。敲减RAP1A后E-cadherin的表达上调,波形蛋白和N-cadherin下调。4.过表达FOXO3后会表现出和沉默RAP1A后相似的生物学变化,HT29和SW620的增殖,抗凋亡,克隆形成均被抑制（P0.05）。5.波形蛋白的表达与肿瘤浸润程度显著相关（p0.05）,波形蛋白的表达水平是影响II期高危结直肠癌患者的独立预后因素（p0.05）。结论RAP1A可通过PTEN/FOXO3/CCND1信号通路以及调控EMT促进结直肠癌的发生发展。大样本的临床回顾分析表明RAP1A可作为结直肠患者总体生存的独立预后因素,通过靶向RAP1A基因抑制肿瘤的生长有望成为治疗结直肠癌的新策略。