农杆菌介导的不同蓝莓品种遗传转化体系的建立

作     者：刘嘉欣 

作者单位：北京林业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张凌云;王政

授予年度：2018年

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090201[农学-果树学] 

主      题：蓝莓 再生不定芽 遗传转化 

摘      要：蓝莓为杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vaccinium)多年生灌木或小灌木。蓝莓具有极高的营养价值和保健价值,市场潜力巨大。蓝莓的种植对栽培环境要求比较苛刻,因此培育出具有抗性的蓝莓品种提高蓝莓产量和品质具有重要意义。传统育种方式费时费力,利用植物基因工程育种能有目的地改良生物性状。本实验以蓝莓品种 喜来 、 伯利基塔 、 莱格西 和 钱德勒 组培苗叶片为材料,探究不同激素组合、造伤方式、叶片位置、叶片放置方式、苗龄等因素对叶片再生不定芽的影响;以建立的叶片高频再生体系为受体体系,转化VcNF-YC9基因,探究筛选抗生素生素浓度、抑菌抗生素浓度、农杆菌浓度、侵染时间和共培养天数等因素对农杆菌介导的蓝莓叶片遗传转化的影响。主要研究结果如下:1蓝莓叶片再生不定芽体系的建立本实验确立了叶片直接诱导不定芽的最佳配方为WPM+1.0 mg/LTDZ+0.1 mg/LNAA;对于较大的 喜来 叶片采取不伤叶缘沿主脉剪三刀的造伤方式,对于较小的 莱格西 叶片采取切去两端的造伤方式;采取叶片反面接触培养基的放置方式;选取靠近顶部的展开叶;选取继代40 d左右的组培苗;不定芽丛最佳壮苗培养基为 WPM+0.5 mg/LZT+0.2 mg/LNAA。2农杆菌介导的蓝莓叶片遗传转化本实验建立的叶片遗传转化体系为:转化 喜来 叶片使用30 mg/L卡那霉素,500 mg/L羧苄青霉素浓度,农杆菌培养至OD600=0.6 min,侵染5 min,共培养6d,获得4株转化VcNF-YC9阳性植株;转化 伯利基塔 叶片使用25 mg/L卡那霉素浓度,500 mg/L羧苄青霉素,农杆菌培养至OD600=0.6 min,侵染5 min,共培养6d,获得5株转化VcNF-YC9阳性植株;转化 莱格西 叶片使用15 mg/L卡那霉素,500 mg/L羧苄青霉素浓度,农杆菌培养至OD600=0.4,侵染7 min,共培养4d,获得4株转化VcNF-YC9阳性植株;转化 钱德勒 叶片使用叶片使用25 mg/L卡那霉素,500 mg/L羧苄青霉素浓度,农杆菌培养至OD600=0.4,侵染7 min,共培养4d,获得2株转化VcNF-YC9阳性植株。