AMHDL的制备及质量初步评价

作     者：晏声蕾 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张景勍

授予年度：2019年

学科分类：100702[医学-药剂学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：精氨酸脱亚胺酶 碳纳米管 脂质体 药代动力学 生物等效性 

摘      要：精氨酸脱亚胺酶(Arginine deiminase,ADI)对精氨酸缺陷型肿瘤疗效好,但其是蛋白类药物,易受到外界环境的影响,具有半衰期短、生物利用度低等缺点。聚乙二醇化的ADI目前已进入临床研究阶段。本实验用聚乙二醇化透明质酸(Hyaluronic acid-glycine-methoxy polyethylene glycol2000,HA-g-mPEG)、多壁碳纳米管、羟丙基-β-环糊精等制备精氨酸脱亚胺酶新型多壁碳纳米管杂合脂质体(Novel multi-walled carbon nanotube hybrid nanoliposomes containing arginine deiminase,AMHDL),希望提高ADI酶活性,增加ADI稳定性,延长ADI在体内的滞留时间,提高ADI的生物利用度。第一部分AMHDL的制备及理化特性。目的:制备AMHDL,测定理化参数。方法:制备AMHDL并考察相关理化参数。结果:合成了HA-g-mPEG,制备得到了AMHDL,透射电镜下观察为类圆形,平均粒径为197.33 nm,平均Zeta电位为-8.79 mV,平均电导率为8.54ms·cm。AMHDL的最适温度为37℃,最适pH为6.5,K为0.75mmol·L,V为13.51μmol·min·L。结论:成功制备AMHDL,AMHDL具有适宜理化参数。第二部分AMHDL的体外稳定性。目的:分别考察AMHDL在不同温度(-20℃、4℃和55℃)条件下、不同pH(pH 5.0.0)条件下、胰蛋白酶存在的条件下和血浆中稳定性。方法:将AMHDL分别放置于不同条件下,测定酶活性。结果:AMHDL在各个条件下的酶活性均高于ADI。结论:AMHDL能提高ADI在不同温度(-20℃、4℃和55℃)条件下、不同pH(pH 5.0.0)条件下、胰蛋白酶存在的条件下和血浆中ADI的稳定性。第三部分AMHDL的荧光光谱实验。目的:用荧光光谱法初步考察AMHDL酶活性和稳定性增强的机制。方法:用荧光光谱法考察ADI的构效关系荧光图谱、ADI与B-AMHDL膜的相互作用以及加热前后AMHDL的荧光强度变化。结果:AMHDL的荧光强度高于ADI;ADI与B-AMHDL膜的结合后荧光强度下降;加热后AMHDL和ADI荧光强度均下降,但AMHDL和ADI相比荧光强度下降得更少。结论:AMHDL能增加ADI酶活性和稳定性的原因可能为AMHDL使ADI构型改变,ADI与B-AMHDL膜有相互作用,AMHDL能保护ADI的三维结构。第四部分AMHDL药代动力学研究。目的:考察AMHDL在大鼠中药代动力学行为。方法:大鼠静脉注射AMHDL,在预设时间点取血,测定酶活性,计算药代参数,评价AMHDL和ADI的生物等效性。结果:非室模型结果表明,AMHDL的AUC(0-96 h))为ADI的3.74倍,C为ADI的1.53倍,T为ADI的1.10倍,MRT(0-96 h))是ADI的2.14倍,ADI的Cl是AMHDL的7.00倍。AMHDL的相对生物利用度是ADI的374.06%。室模型分析结果和非室模型分析结果基本相符。AMHDL和ADI均符合三室模型。ADI和AMHDL的AUC对数比值的90%可置信区间的范围为73.2%5.8%,C对数比值的90%可置信区间为79.3%3.5%,T经Wilcoxon非参数检验得到P0.05。结论:AMHDL显著提高了ADI的生物利用度,AMHDL和ADI生物不等效。