粒毛盘菌胞外多糖缓解小鼠铅中毒及抗慢性肾衰竭活性研究

作     者：侯国华 

作者单位：合肥工业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：叶明

授予年度：2019年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100705[医学-微生物与生化药学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：粒毛盘菌多糖 二肽 理化性质 铅中毒 慢性肾衰竭 

摘      要：本文研究了粒毛盘菌YM240胞外多糖(LEP240)二肽修饰前后其理化性质的变化及LEP240对慢性肾衰竭小鼠的肾保护作用,此外,还研究了粒毛盘菌YM281胞外多糖(LEP281)对铅(Pb)中毒小鼠的肝、肾保护作用。LEP240经分离纯化后得到均一性多糖,对其进行二肽修饰(精氨酸-组氨酸)后研究LEP240及其二肽衍生物(LEP240-RH)的理化性质和体外免疫调节活性。结果表明,Y LEP240-RH的支接度为12.86%,LEP240、LEP240-RH的分子量分别为4.26×10 Da、1.45×10 Da。通过FT-IR和H NMR测定了LEP240和LEP240-RH的结构特征,结果显示LEP240-RH中有新的C-N键生成,表明多糖修饰成功。扫描电子显微镜(SEM)结果表明,LEP240表面光滑、外观呈块状;LEP240-RH表面粗糙,分布相对松散,呈条状。流变学研究表明,相同浓度下的LEP240和LEP240-RH具有相似的剪切稀化行为,可以形成凝胶结构。热特性分析结果(DSC)表明LEP240-RH具有比LEP240更好的热稳定性,在温度升高过程中LEP240有两个分解过程,而LEP240-RH有三个分解反应,说明经过修饰的多糖有新的化学键的生成。此外,体外免疫实验结果表明,用较高剂量(200μg/mL)的LEP240和LEP240-RH处理均可刺激RAW264.7巨噬细胞的增殖,增加细胞因子(IL-2,IL-6和TNF-α)的分泌,且LEP240-RH对刺激巨噬细胞产生细胞因子表现出更好的效果。建立了小鼠铅中毒模型,研究LEP281对铅中毒小鼠肝、肾损伤保护作用。结果表明,LEP281降低了Pb导致的小鼠体重减轻。生化分析表明,LEP281的治疗可以改善小鼠肝肾组织的抗氧化水平(CAT,GSH-Px)和组织(肝、肾)的损伤。组织病理学结果表明LEP281可以减轻Pb诱导的肝和肾细胞损伤并对已经破坏的细胞结构有一定的修复作用。为进一步研究其对肝肾保护作用机制,用Western blot检测了与肝和肾细胞凋亡有关的关键蛋白(caspase-3,Bax,Bcl-2,TGF-β1和α-SMA)表达量,结果表明,高剂量的LEP281(200 mg/kg)可以通过调节细胞凋亡对铅诱导的肝肾损伤起到保护及修复作用。饲喂腺嘌呤构建了小鼠慢性肾功能衰竭(CRF)模型,探究LEP240对CRF小鼠的肾保护作用。组织病理学结果表明,LEP240可以改善肾细胞的结构,降低CRF小鼠组织中胶原蛋白的表达,从而减少肾纤维化面积。此外,Western blot(TGF-β,α-SMA,Smad3和p-Smad3)和RT-PCR(TGF-β)的结果表明,LEP240通过TGF/Smad途径改善了小鼠肾脏功能。