哈尔滨地区犬乳腺肿瘤病理学诊断与流行病学调查

作     者：李永岐 

作者单位：东北农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘云;王福军

授予年度：2019年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：犬乳腺肿瘤 流行病学 HE染色 免疫组化 EMT 

摘      要：随着社会养犬量的增加并且犬只老龄化的增长,犬肿瘤性疾病的种类和数量呈逐年上升趋势,尤其是乳腺肿瘤最为多发,占雌犬肿瘤性疾病近50%,宠物主人对患犬的治疗方案和预后评估提出了更高的需求。为了提高患犬的生活质量及满足宠物主人的需求,在兽医临床上寻求更加完善的治疗方案及更加准确的预后评估,本课题研究了乳腺肿瘤组织上皮-间质转化(EMT)。上皮-间质间转化(EMT)与乳腺肿瘤的发生、发展相关,EMT相关蛋白的表达促使肿瘤细胞骨架完整性受到破坏,细胞间的黏附功能下降,失去细胞极性,导致肿瘤细胞发生、侵袭和转移,即上皮标志物E-cadherin表达减少,而间质标记物N-cadherin、Vimentin表达升高,E-cadherin表达向N-cadherin表达转移是EMT的重要机制,EMT相关蛋白在乳腺肿瘤的发生过程中起到了至关重要的作用。另外,犬乳腺肿瘤疾病的发生发展与人类乳腺肿瘤疾病有很大的相似之处,可以作为人类乳腺肿瘤EMT研究的动物模型。本实验通过收集2015年5月至2018年7月东北农业大学附属动物医院以及哈尔滨市部分动物医院手术摘除所获得的犬乳腺肿瘤组织136例,根据WHO组织病理学分类标准并且经过两位权威乳腺肿瘤组织病理学专家来确定乳腺肿瘤病理的良恶性,恶性程度及亚型。通过查阅这些动物医院这段时间所有雌性犬的病例档案,记录所有雌性犬每种品种的数量以及患乳腺肿瘤雌性犬每种品种的数量,并且记录犬只的食物类型、发病部位、发病年龄、生育、绝育等情况。通过处理数据并制作图表的方式来显示犬乳腺肿瘤的发生与这些指标之间的关系,最后对调查结果进行统计学分析。将所有病例组织制成石蜡切片后,采用HE染色技术染色,并对肿瘤组织的来源与性质进行鉴定,进一步采用免疫组化方法检测53例恶性犬乳腺肿瘤组织中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和EZH2的表达,并探讨其表达水平与犬乳腺肿瘤临床病理特征的关系,旨在为犬乳腺肿瘤的临床诊断、预后评估及治疗提供理论参考依据。实验结果表明:(1)本次流行病学调查发现哈尔滨地区乳腺肿瘤患犬的品种有22种,易患品种以混血犬和贵宾犬为主;分别以自制犬粮、商品犬粮、人食用的饭菜、肉类为主食的犬只,乳腺肿瘤的发病率依次升高;后腹对乳区和腹股沟对乳区发生乳腺肿瘤的概率大于其他乳区且左侧乳区大于右侧乳区;随着年龄的增长,犬乳腺肿瘤的发病率呈上升趋势;第一次发情前绝育可以有效预防犬乳腺肿瘤的发生,且生育次数与乳腺肿瘤的发生概率呈现负相关性。(2)HE染色病理学鉴定结果显示:良性乳腺肿瘤占54.41%(74/136)分别为纤维腺瘤23例、导管内乳头状瘤14例、乳腺小叶增生11、腺病10例、真皮纤维瘤9例和其他良性乳腺肿瘤7例;恶性乳腺肿瘤占45.59%(62/136)包括浸润性导管癌41例、导管内乳头状癌6例、乳腺鳞状细胞癌5例、微乳头状癌3例、导管原位癌3例和其他恶性乳腺肿瘤4例。(3)免疫组织化学结果显示:E-cadherin蛋白表达在恶性犬乳腺肿瘤组织中显著降低,而正常犬乳腺组织中E-cadherin呈现高表达,主要定位于细胞膜,呈淡黄色或棕褐色,少量表达于细胞质;N-cadherin和Vimentin主要定位癌细胞的细胞膜和细胞质,EZH2的表达主要在恶性肿瘤细胞的细胞核中,且这三者在恶性犬乳腺肿瘤组织中呈现高表达。进一步通过χ检验分析53例恶性犬乳腺肿瘤组织中EMT相关蛋白的表达与临床病理因素关系,结果显示:E-cadherin的表达与犬乳腺肿瘤的转移及组织学分级密切相关(P0.05)。N-cadherin、EZH2、Vimentin的表达与组织学分级密切相关(P0.05)。