Kv1.3阻滞剂调节巨噬细胞自噬在实验性结肠炎中的作用研究

作     者：梅咏玉 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：梅俏

授予年度：2019年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：Kv1.3 DSS 结肠炎 自噬 巨噬细胞 

摘      要：背景:自噬被认为是一种细胞应激反应,在包括固有免疫等过程中起重要作用。巨噬细胞是主要的先天免疫细胞,且常在DSS诱导的实验性结肠炎中被激活。功能失调的自噬促进巨噬细胞产生促炎细胞因子在IBD的发病机制中具有重要影响。Kv1.3钾通道存在于巨噬细胞中,Kv1.3钾通道可控制巨噬细胞的活化和增殖过程。PAP-1是一种特异性的Kv1.3通道阻滞剂,大量应用于实验动物研究。PAP-1是否通过调节巨噬细胞自噬减轻结肠炎的相关研究目前国内外尚无报道。因此,探讨PAP-1对结肠炎肠道炎症的影响及其可能机制对于结肠炎的防治具有重要的理论意义。目的:探讨特异性Kv1.3阻滞剂PAP-1抗DSS结肠炎小鼠的疗效及作用机制。方法:将C57BL/6小鼠随机的分为以下4组:正常对照组、正常对照+PAP-1组、DSS模型组、DSS+PAP-1组。在小鼠饮水中加入终浓度为5%DSS制备实验性结肠炎模型,PAP-1(3μg·g-1,每天3次,连续7天)腹腔注射给药。正常对照组及模型组予等体积溶剂腹腔注射。实验中进行结肠炎小鼠炎症活动指数(DAI)评分;实验结束后收集小鼠腹腔巨噬细胞、脾脏及结肠组织,进行结肠HE染色评分,结肠组织匀浆检测MPO活性及IL-1,IL-6,IL-10及TNF-α水平;免疫荧光共聚焦显微镜观察结肠F4/80+巨噬细胞改变;透射电镜观察腹腔巨噬细胞及脾巨噬细胞自噬相关结构;RT-q PCR、Western Blot检测小鼠结肠、腹腔巨噬细胞和脾巨噬细胞i NOS、IL-1β及自噬相关标志物LC3-Ⅱ、p62及Beclin-1的表达。结果:成功制备小鼠DSS结肠炎模型,PAP-1减少DSS结肠炎小鼠体重下降,降低DAI评分及结肠HI评分(P0.05);同时PAP-1降低结肠组织中MPO活性(P0.05)及IL-1,IL-6及TNF-α水平(P均0.05),升高IL-10水平(P0.05)。与模型组比较,PAP-1降低结肠F4/80表达,腹腔巨噬细胞及脾巨噬细胞内自噬泡增多;同时PAP-1降低结肠、腹腔巨噬细胞和脾巨噬细胞i NOS、IL-1β及p62表达,明显升高LC3-Ⅱ及Beclin1表达(P均0.05)。结论:PAP-1可能通过减少结肠炎小鼠结肠及巨噬细胞自噬受损,降低巨噬细胞活化及炎症因子水平,减轻结肠炎症损害。